农业农村部公告第323号-17-2020 转基因植物及其产品成分检测 抗虫耐除草剂玉米C0030.2.4及其衍生品种定性PCR方法.pdf

农业农村部公告第323号一17一2020前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业农村部科技发展中心、浙江省农业科学院。本标准主要起草人：陈笑芸、沈平、汪小福、王颗潜、徐俊锋、徐晓丽、彭城、魏巍、缪青梅。农业农村部公告第323号一17一2020转基因植物及其产品成分检测抗虫耐除草剂玉米C0030.2.4及其衍生品种定性PC方法1范围本标准规定了转基因抗虫耐除草剂玉米C0030.2.4转化体特异性普通PCR和实时荧光PCR两种检测方法。本标准适用于转基因抗虫耐除草剂玉米C0030.2.4及其衍生晶种，以及制品中C0030.2.4转化体成分的定性PCR检测。2规范性引用文件下列文件对于本件的月尽)PDTS的颜本适用于木文件的。凡注日期的穷凡是不注日期的引用文件其最版本所有的修改单)适用术文农业部1485考公告因植物及其产品成分检测DA提取和纯化农业部1861012转基闪植物及产品成分检测玉米内标雅基因定性PCR方法农业部2031号告C092013殖物产品成分袖样YT672钻基因植物及其产品检通用要3术语和定义刀农业部18612012界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1工C0030.2.4转化体特异性序列event-specific sequenceofC00302C0030.2.4的外源片段5端与玉米基因组的连接区序列以及外源插人段3端与玉米基因组的连接区序列，包活玉米港组列及转化载体DA部阶序列m4原理正根据抗虫耐除革剂转化体特屏性序列设计特异性物及绿针，对试样进行PC扩增。依据是否扩增获得顶期的段或典型扩增曲线，判断样品中乐含有抗虫耐除草剂玉米C0030.2.4转化体成分。5试剂和材料除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸榴水5.1琼脂糖。5.210g/L溴化乙锭(EB)溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。警告溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。5.310mol/L氢氧化钠(Na0H)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容至200mL。5.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Nae)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液（见5.3）直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液（见5.3）调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa(121)条件下灭菌20min。5.51mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HC)溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于