农业农村部公告第323号-21-2020 转基因植物及其产品成分检测 数字PCR方法制定指南.pdf

ICs65.020.01B04中华人民共和国国家标准农业农村部公告第323号一21一2020转基因植物及其产品成分检测数字PCR方法制定指南Detection of genetically modified plants and derived products-Technical guidelines for development of digital PCR methods2020-08-04发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布农业农村部公告第323号一21一2020转基因植物及其产品成分检测数字PCR方法制定指南1范围本标准规定了转基因植物及其产品数字PCR检测方法的建立与确认的总体要求。本标准适用于转基因植物及其产品成分检测的数字PCR检测方法的建立与确认。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适合于本文件。农业部2259号公告一4一2015定性PCR方法制定指南农业部2259号公告一5一2015实时荧光定量PCR方法制定指南3术语和定义农业部2259号公告一4一2015和农业部2259号公告5一2015界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1数字PCR digital PCR将原始PCR反应体系进行分割，进而对所有小的反应体系进行扩增，通过阳性率和泊松分布计算获得样品中靶序列拷贝数或拷贝数浓度。注：现阶段数字PCR包括芯片式及徽滴式两种3.2微反应体系tiny reaction partition将DNA模板、引物/荧光探针、DNA聚合酶及其缓冲液等PCR反应体系充分混匀后，通过乳化、芯片等方式分配至体积相同且相互物理隔离的油包水液滴或其他微孔、微室中所形成的小体积荧光PR反应体系。3.3正确度trueness多次测试的均值与采纳的标准值之间的接近程度。4实验室资质进行转基因生物数字PCR检测方法的建立与确认的实验室，一般应满足以下要求：a)具备资质认定和/或实验室认可的条件及证明；b)从事过转基因植物成分定量测量的工作：c)参加过权威部门组织的转基因植物定量测量能力验证或计量比对，并且测量结果在可控范围内。5技术要求5.1方法的建立数字PCR方法的建立应包括如下步骤：)检测引物和探针的设计与筛选：依据靶序列设计引物和探针，通过试验对其进行比较分析，筛选出具有严格特异性和灵敏度的引物和探针组合；b)PCR反应体系和反应程序优化：通过试验确定适合的反应体系（最适模板量、引物、探针浓度等）1