GBT 36775-2018 柑橘斑点病菌检疫鉴定方法.pdf

GB/T36775-2018坏死，严重时，叶片脱落；果实病斑圆形至不规则形，离散或联合，最大直径可达3cm4cm,嫩果症状常从增生产生瘤状病斑开始，边缘有黄色晕圈，成熟果实的病斑一般是平坦的，病部木栓化（症状图参见附录B图B.1)。7.2菌落特征在V8培养基平板上2428培养30d后，菌落平铺，呈灰白色，气生菌丝旺盛，绒毛状。培养后期，从菌落中央开始变成灰橄榄色，黑灰色至黑色，逐渐菌落边缘菌丝体颜色也逐渐加深，菌落中央隆起，质地逐渐变硬，炭质，表面凹凸不平，菌落背面为深墨绿色。7.3病菌形态分生孢子梗从气孔生出，浅褐色至褐色，具多个隔膜，平滑，宽34m7m,高27um240um,分生孢子梗单生、丛生或形成分散的宽的联丝体，无分枝，直径为12m45m,通常从子座上长出，子座直径为30m60um。分生孢子顶生或顶侧生，单生或2个4个多孢链状生，平滑，透明至浅褐色，圆柱形或稍弯，顶部圆形，基部稍平钝至弧形弯曲，1个6个（通常3个4个）分隔，23m87um长，分生孢子4m5um(4m6.5m)宽，基部24m3um宽。产孢细胞末端具轻微膝状弯曲，产孢位置具明显的孢痕疤，但不增厚（病菌形态特征图参见附录C图C.1)。7.4致病性测定分离得到的病菌分离物得到柯赫氏法则验证。即以柑橘果实为接种材料，利用6.2.4方法接种30d后，柑橘果实出现干腐、组织硬化等症状。从病部得到的分离物培养特征、形态特征与供试接种菌株一致。8结果判定符合下列任一种情况均可判定为检出柑橘斑点病菌：如果病部有明显的病状和病征，进行分离培养后，病菌形态学特征和菌落特征与7.1和7.2吻合。如果病部有病状但无病征，经保湿培养和（或）分离培养所产生的病菌形态学特征和菌落特征与7.1、7.2吻合，致病性测定结果符合7.4。9样品和资料的保存9.1样品的保存检验为阳性的样品标注来源、寄主、分离时间、鉴定人后置于4冰箱保存；病菌纯培养菌株在含20%甘油的冻存管中一80保存，或将菌株转接在PDA斜面上培养，待菌丝体长满斜面后，置于4下保存，并定期（约180d)转管。对鉴定为柑橘斑点病菌的样品至少保存6个月，以备复核谈判和仲裁，样品保存期满后，需无害化处理。