GBT 36833-2018 马铃薯X病毒检疫鉴定方法.pdf

GB/T36833-2018前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国中山出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、渐江大学、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘洪义、刘忠梅、车瑞丰、陈定虎、魏梅生、张星哲、李桂芬、张永江、吴建祥、封立平、袁建江、杨立群。GB/T36833-2018马铃薯X病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了马铃薯X病毒的检疫鉴定方法。本标准适用于可能带有马铃薯X病毒的马铃薯植株、繁殖材料及其他寄主植物的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB7331马铃薯种薯产地检疫规程SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法3马铃薯X病毒基本信息中文名：马铃薯X病毒学名：Potato virus X缩写：PVX分类地位：甲型线状病毒科(Alphaflexiviridae),马铃薯X病毒属(Potexvirus)。传播途径：田间自然条件下主要靠寄主植株不同部位、寄主植株之间接触摩擦进行机械传播，在农事或园艺操作中，还可以借助有关工具器械进行传播。远距离传播通过种薯等无性繁殖材料的调运完成。有资料表明马铃薯实生种子可传带该病毒，但在生产上意义不大；未见其他茄科作物种子传带该病毒的资料。据报道，某些昆虫如异黑蝗(Melanoplus differentialis)和绿丛螽斯(Tettigoniaviridissima)的咀嚼式口器经机械作用可传播该病毒，菟丝子(Cuscuta cam pestris)和集合油壶菌(Synchyrtium endobioticum)也能传播该病毒。马铃薯X病毒的其他信息参见附录A。4方法原理PVX的基因组特征和免疫原性是该病毒检疫鉴定的依据。依据PVX的基因组特征建立反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光反转录PCR(Real-time RT-PCR)和反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法；依据PVX免疫原性建立酶联免疫吸附测定(ELISA)方法、免疫层析试纸条检测方法和斑点酶联免疫吸附测定(dot-ELISA)方法；通过这些方法的有效组合，判断样品是否带有PVX。5仪器设备、用具及试剂5.1仪器设备酶标仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳系统、生物安全柜、小型离心机、台式冷冻离心机、水浴锅、pH计、凝胶成像系统、制冰机、超低温冰箱、常规冰箱、电子天平(0.001g)、涡旋振荡器、组织捣碎机、超1GB/T36833-20187.6dot-ELISA检测dot-ELISA检测见附录G.8结果判定、8.1无可疑症状的样品，经PVX特异性的血清学检测(7.1、7.5、7.6任选一种)或分子检测(7.2、7.3、7.4任选一种)后，任意一项结果为阴性时，则判定样品不带有PVX;有可疑症状的样品，经PVX特异性的血清学检测(7.1、7.5、7.6任选一种)和分子检测(7.2、7.3、7.4任选一种)后，两项结果均为阴性时则判定样品不带有PVX。8.2PVX特异性的血清学检测结果(7.1、7.5、7.6任选一种)、分子检测结果(7.2、7.3、7.4任选一种)中任意两项为阳性时，则判定样品带有PVX。9样品保存与结果记录9.1样品保存样品直接放于一80冰箱或冷冻干燥后放于一20或一80冰箱保存1年，保存的样品要做好标记和登记工作。以备复验、谈判和仲裁。保存期满后，应经灭活处理。9.2结果记录完整的实验记录要包括：样品的来源、种类、时间、实验检测时间、地点、方法和结果，并有实验人员的签字；酶联免疫吸附方法应有酶联反应的原始数据，dot-ELISA检测应有显色图片，免疫层析试纸条检测应有结果图片，RT-PCR检测应有电泳结果图片，Real-time RT-PCR检测应有扩增曲线结果图片，RT-LAMP检测应有结果图片。