GBT 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验.pdf

GB/T4789.5-2003前言本标准对GB/T4789.5一1994食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验进行修订。本标准与GB/T4789.5一1994相比主要修改如下：一按照GB/T1.1一2000对标推文本的格式和文字进行修改。一修改并规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.5一1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：江西省卫生防疫站、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：何晓背、冉陆、付萍、杨宝兰、姚景会，本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。34GB/T4789.5-20036操作步骤6.1增菌以无菌操作取检样25g(mL),加入装有225mLGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/minl0000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36培养6h8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。6.2分离和初步生化试验6.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36培养18h24h,志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36培养18h24h,分别观察结果。6.2.3下述培养物可以弃去：a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b)在18h24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；)不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物：d)产气的培养物；e)有动力的培养物；)产生硫化氢的培养物。6.2.4凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。6.3血清学分型和进一步的生化试验6.3.1血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏南多价血清不凝集的南株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。表1福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原在群因子血清中的凝集型和亚型型抗原群抗原3,467,8la1,2,4,5,9+1bI1,2,4,5,931,3.4+一2bI1,7,8,9+3a1,6,7,8,9+3b01,3,4,6+4aW1,(3,4)(+)4b1,3,1,6+5aE1,3,45bv1,5,7,9*I1,2,(4)(+)X变体1,7,8,9Y变体1,3,4*注：十凝集：一不凝集：()有或无。