GBT 35526-2017 化学品(抗)雄性性征短期筛选试验 大鼠Hershberger生物检测法.pdf

GB/T35526一2017引言1998年，OECD开始修订并发展检测和筛选内分泌干扰物的试验方法。上述活动之一就是发展了大鼠Hershberger生物筛选试验方法。通过在医药工业使用几十年后，1962年，该方法首次被官方专业委员会作为一种雄性激素化学品的标准筛选工具。2001年一2007年，Hershberger生物筛选试验进行了大量的验证项目：包括方法背景资料研究、具体试验方法汇总、解剖技术的发展以及实验室内部和实验室之间试验方法可靠性和重现性的验证研究。上述验证研究使用雄性激素参照物（丙酸睾丸酮）、两种合成的雄性激素（醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基睾丸素）、抗雄性激素药物（氟他胺）、天然雄性激素合成抑制剂（非那雄胺）、几种弱抗雄性激素农药（利谷隆、乙烯菌核利、速克灵和p,p-DDE)和5-还原酶抑制剂（非那雄胺）和两种阴性对照物（二硝基苯酚和壬基苯酚）。本标准是长期生物鉴定试验和验证试验的经验总结。Hershberger生物筛选试验是一种使用雄性生殖系统中有关组织的短期在体筛选方法。试验始于20世纪30年代，40年代的时候增加了雄性生殖系统中的雄性激素反应肌。20世纪60年代，使用标准方法对700多种可能的雄性激素进行了评估。本标准是基于检测去势后的雄性大鼠体内五种雄性激素依赖组织质量改变的一种筛选方法。本方法用于评估化学品类似雄性激素激动剂、雄性激素拮抗剂或者5-还原酶抑制剂的生物活性。五种雄性激素依赖组织为腹侧前列腺(VP)、精囊(SV)(包括液体和凝固腺)、提肛肌-球海绵体肌复合体(LABC肌)、成对的尿道球腺(COW)和龟头(GP)。在去势的雄性大鼠中，受雄性激素的影响，上述五种组织的质量会发生相应增加。同一受试动物，使用雄性激素参照物后五种组织的质量均发生增长，再使用雄性微素拮抗剂能使五种组织的质量均发生下降。三个阶段的验证试验证实，Hershberger生物筛选试验的首选动物模型是去势的青春期前的雄性大鼠。Hershberger生物筛选试验是一种雄性激素受体激动剂、雄性激素拮抗剂和5a-还原酶抑制剂的筛选方法。作为提供单一的内分泌机理数据的体内筛选试验方法被包括在OECD内分泌干扰化学品的测试和评估框架第3级中。本试验包含在内分泌干扰物体内和体外系列试验中，用于判断受试物是否对内分泌系统产生潜在干扰作用，从而导致人类健康和环境的危害。考虑到动物福利，未经去势的刚断奶的雄性大鼠也可以作为Hershberger生物筛选的替代动物模型。这种方法也通过验证，但是，微量的抗雄性激素验证研究中未经去势的刚断奶的雄性大鼠不能够产生一致的响应。因此，本标准中并不包括这项试验的内容。作为雄性激素受体的配体，雄性激素受体激动剂和拮抗剂可分别激活或抑制受体控制的基因转录。此外，在一些雄性激素的靶组织中，某些化学品会抑制睾酮转化为更有活性的二氢睾酮(5还原酶抑制剂)。这些物质有可能对生殖和发育产生不利影响。因此，需要迅速评估并评价化学品是否是雄性激素受体激动剂、拮抗剂或5-还原酶抑制剂。虽然通过受体结合、体外报告基因的转录激活效应检测到的雄性激素配体对受体的亲和力与其产生危害有一定关系，但并不是潜在危害的决定性因素。其他因素还包括进入体内之后的代谢活化、灭活、靶器官中的分布情况和体内的清除情况。这就需要在筛选化学品的时候在相关的条件和暴露下进行。如果化学品的吸收一分布一代谢一清除(ADME)已知，则体内的评估就相对不重要一些。在雄性激素刺激下，去势的青春期前的雄性大鼠体内雄性激素依赖组织生长迅速、明显。啮齿类动物，特别是大鼠，广泛用于毒性危害研究。因此，本试验中，使用去势的青春期前的雄性大鼠和五种靶组织筛选雄性激素受体激动剂、拮抗剂和5-还原酶抑制剂。本标准的可信性和重现性是通过OECD实验室内部和实验室间的比对验证了的。所有的雄性激素和雄性激素拮抗剂的操作步骤均在本标准中体现。虽然在检测抗雄性激素的验证试验中，不同实验室使用的丙酸睾丸酮剂量有所区别，分别为