GBT 23504-2009 食品中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法.pdf

ICs 67.050X 0 4 乃叫 卜侈t P中 华 人民 共 和 国 国 家 标 准GB/T2350-2009食品中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法Determination of zearalenone in food-High performanceIiquid chromatographic method with immunoaffinity column clean-up嘛螂;i2009-04-08发布2009-05-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验墅嫖笋垦 发布中 国 国 家 标 准 化 管 理食品伙伴网http:/GB/T235042009口本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会(SAC/TC64)提出。本标准 由全国食品工业标 准化技术委员会食 品通用检测技术分技术 委员会(SAC/TC64/SC8)归口。本标准起草单位:青 岛市产品质量监督检验所、中华人 民共和国山东 出入境检验检疫局、中检维康技术有限公司、青岛啤酒股份有限公司。本标准主要起草人:张辉珍、董建军、吕宁、李宏伟、李惠颖、翟士星、王雄。亠刖食品伙伴网http:/GB/T235042009食品中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法1 范围本标准规定了食 品中玉米赤霉烯酮含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。本标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中玉米赤霉烯酮含量的测定。本标准的方法检 出限:粮食和粮食制品的检出限为u g/k g,酒类的检出限为u g/k g,酱油、醋、酱及酱制品的检出限为50u g/k g。2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用而成为本标准 的条款。凡是注 日期 的引用文件,其 随后所有的修改单(不 包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B/T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法(G B/T 6 6 8 2-2 0 0 8,o 3 6 9 6:1 9 8 7,M O D)3 方法提要用提取液提取试样 中的玉米赤霉烯酮,经免疫亲和柱净化后,用 高效液相色谱荧光检测器测定,外标法定量。4 试剂和材料除另有说 明外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1 甲醇:色谱纯。4.2 乙腈:色谱纯。4.3 提取液:乙腈+水(9+1)。4.4 PBS清洗缓 冲液:称 取8.0g 氯化钠、l。2g 磷酸氢二钠、0.2g 磷酸二 氢钾、0.2g 氯化钾,用990m L水将上述试剂溶解,然后用浓盐酸调节 p H至7.0,再用水定容至1L。4.5 玉米赤霉烯酮标准品:纯度98%。4.6 玉米赤霉烯酮标准储各液:准确称取一定量 的玉米赤霉烯酮标准品,用 甲醇+乙 腈(1+D溶解,配成0.1m g/m L的标准储各液,在一 保存,可使用3个月。4.7 玉米赤霉烯酮标准工作液:根据使用需要,准 确 吸取一定量 的玉米赤霉烯酮储备液,用 流动相稀释,分别配成相当于1 0 ng/mL、5 0 ng/mL、1 0 0 ng/mL、0 ng/mL、5 0 0 ng/mL 的标准工作液,4 保存,可使用7d。4.8 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。4.9 玻璃纤维滤纸:直径11c m,孔径1.5u m,无荧光特性。5 仪器和设备5.1 天平:感量0.0 0 1 g。5.2 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。5.3 均质器:转速大于1 0 0 0 0 r/min。食品伙伴网http:/GB/T23504-20095.4 高速万能粉碎机:转速1 0 0 0 0 r/m i n。5.5 玻璃注射器:1 0 m L。5.6 试验筛:1 m m 孔径。5.7 空气压力泵。6 分析步骤6.1 试样制备与提取6.1.1 粮食和粮食制品:将样品研磨,硬质的粮食等用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛(5.6),不要磨成粉末。称取5Og(精确到0.01g)磨碎的试样于100m L容量瓶中,加入5g 氯化钠,用提取液(4.3)定容至刻度,混匀,转移至均质杯中,高速搅拌提取2m h。定量滤纸过滤,移取10.0m L滤液于50m L容量瓶 中,加水定容至刻度,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液A于干净的容器 中。6.1.2 酒类:取脱气酒类试样(含 二氧化碳 的酒类使用前先置于4冰箱冷藏30m i n,过滤或超声脱气)或 其他不含二氧化碳的酒类试样20g(精确到0.01g)于50m L容量瓶 中,用 乙腈定容至刻度,摇匀。移取10.0m L滤液于50m L容量瓶 中,加水定容至刻度,混匀,用 玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液B于干净的容器 中。6.1.3 酱油、醋、酱及酱制品:称取25g(精确到0.01g)混匀 的试样,用 乙腈定容至100.0m L,超声提取2m i n,定量滤纸过滤,移取10.0m L滤液于50m L容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液C于干净的容器 中。6.2 净化将免疫亲和柱连接于玻璃注射器(5.5)下,准确移取6.1中的滤液A或B或C10.0m L,注人玻璃注射器 中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力,使溶液以约1滴/s 的 流速通过免疫亲和柱,直至空气进人亲和柱 中。依次用10m L PBS清洗缓冲液(4.4)和10m L水淋洗免疫亲和柱,流 速约为1滴/s 2滴/s,直 至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液,抽干小柱。6.3 洗脱准确加人1.0m L甲醇洗脱,流速约为1滴/s,收 集全部洗脱液于干净 的玻璃试管 中,用 甲醇定容至1 mL,H P L C 测定。6.4 高效液相色谱参考条件a)色谱柱:C 1:柱,5 u m,1 5 0 m m 4.6 m m 或相当者;b)流动相:乙腈+水+甲醇(46+46+8);c)流速:1.0 mL/min;d)柱温:35;e)进样量:2 0 uL 1 0 0 uL;D 检测波长:激发波长274n m,发射波长狃0n m。6.5 定量测定以玉米赤霉烯酮标准工作溶液浓度为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘 制标准工作 曲线,用 标 ,准工作 曲线对试样进行定量,标准工作溶液和试样溶液 中玉米赤霉烯酮的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色谱条件下,玉米赤霉烯酮标准品色谱图参见图A.1。6.6 空白试验除不加试样外,空 白试验应与测定平行进行,并采用相同的分析步骤。6.7 平行试验按 以上步骤,对 同一试样进行平行试验测定。7 结果计算试样中玉米赤霉烯酮的含量按式(1)计 算:2食品伙伴网http:/GB/T23504一20091)式 中:X试样 中玉米赤霉烯酮的含量,单位为微克每千克(u g/k g);c 1试样溶液中玉米赤霉烯酮的浓度,单位为纳克每毫升(n g/m L);c。空 白试样溶液中玉米赤霉烯酮的浓度,单位为纳克每毫升(n g/m L);甲醇洗脱液体积,单位为毫升(m L);彻试样的质量,单位为克(g);r 稀释倍数。检测结果以两次测定值的算术平均值表示。计算结果表示到小数点后1位。回收率添 加 浓 度 在5 0 u g/k g 2 0 0 u g/k g 时,回收 率 在7 0%1 0 0%之间。重复性在重复性条件下,获 得 的玉米赤霉烯 酮 的两次独立测试结 果 的绝对差值 不大于其算 术平 均值10%。X=的食品伙伴网http:/GB/T235042009oo0丨寺o臼0附 录 A(资 料性 附录)玉米 赤霉烯酮标准 品的液相 色谱图发射波长:0 0 O nm2 5 3 8 5 o 6 3 7.5 8 8 1 0 0图A.1 玉米赤霉烯酮标准 品的液相色谱 图GB/T 235042009打 印 日期:9O09年6月 1日版杈专有 侵权必究书 号:1 5 5 0 6 6 3 6 9 5 0定价:1 4.0 0 元食品伙伴网http:/