GBT 23503-2009 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法.pdf

ICs 67.050X 04冫“呷中 华 人民 共 和国 国 家 标 准GB/T2350-2009食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测免疫亲和层析净化高效液相色谱Determination of deoxynivalenol in food-High performanceliquid chromatographic method with immunoaffinity column clean-up丿 、f o 卩j 02009-04-08发布2009-05-01 实施定法中华人民共和国国家质量监督检嗖墅薅异垦 发布中 国 国 家 标 准 化 管 理食品伙伴网http:/GB/T23503-2009刖 舀本标准的附录A为资料性附录。本标准 由全国食品工业标准化技术委员会(S C/TC64)提出。本标准 由全国食 品工业标准化技术委员会食 品通用检测技术分技术委员会(SAC/TC64/SC8)归口。本标准起草单位:青 岛市产品质量监督检验所、中华人 民共和国山东 出入境检验检疫局、中检维康技术有限公司、青 岛啤酒股份有限公司。本标准主要起草人:张辉珍、王晓滨、单连菊、吴振兴、林艳、李惠颖、王雄。食品伙伴网http:/GB/T23503-20091 范围本标准规定了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的免疫亲和层析净化高效液相色谱测定方法。本标准适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量 的测定。本标准的方法检出限:粮食和粮食制品的检出限为0.5m g/k g,酒类的检出限为0.l m g/k g,酱油、醋、酱及酱制品的检出限为0.1m g/k g。2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期 的引用文件,其 随后所有的修改单(不 包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然 而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B/T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法(G B/T 6 6 8 2 0 8,I S 0 3 6 9 6:1 9 8 7,M O D)3 方法提要用提取液提取试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,经免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱紫外检测器测定,外标法定量。4 试剂和材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1 甲醇:色谱纯。4.2 乙腈:色谱纯。4.3 聚乙二醇(相对分子质量8000)。4.4 P B S 清洗缓冲液:称取8,O g氯化钠、1.2 g磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾,用990m L水将上述试剂溶解,然后用浓盐酸调节 p H至7.0,再用水稀释至1L。4.5 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品:纯度98%。4.6 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液:准确称取一定量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品,用 甲醇溶解,配成0.l m g/m L的标准储备液,在一 保存,可使用3个月。|4.7 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液:根据使用需要,准 确吸取一定量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标 准储各液,用流动相稀释,分别配成相当于0.1 ug/mL、o.2 ug/mL、0.5 ug/mL、1.0 ug/mL、2.0 ug/mL、5.0 ug/mL 的标准工作液,4 保存,可使用7 d。4.8 脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱。4,9 玻璃纤维滤纸:直径1 1 cm,孔径1.5 um。5 仪器 和设 备5.1 天平:感量0.0 0 1 g。5.2 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.3 均质器:转速大于1 0 0 0 0 min。食免的色醇相烯液菌效刀亠鬲镰化腐净雪析氧层脱和中亲品疫定法测谱食品伙伴网http:/GB/T23503-20095.4 高速万能粉碎机:转速1 0 0 0 0 r/min。5.5 玻璃注射器:1 0 mL。5.6 试验筛:1 mm孔径。5.7 空气压力泵。6 分析步骤6.1 试样制备与提取6,1.1 粮食和粮食制品:将样品研磨,硬质的粮食等用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛(5.6),不要磨成粉末。称取25g(精确到0.01g)磨碎的试样于100m L容量瓶 中加人 5g 聚乙二醇(4.3),用水定容至刻度,混匀,转移至均质杯中,高速搅拌2m i n。定量滤纸过滤后 以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液A于干净 的容器 中。6,1.2 酒类:取脱气酒类试样(含 二氧化碳 的酒类样 品使用前先置于4冰箱冷藏30m i n,过滤或超声脱气)或其他不含二氧化碳的酒类试样20g(精确到0.01g),加人1g 聚乙二醇(4.3),用水定容至25.O m L,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液B于干净的容器中。6.1.3 酱油、醋、酱及酱制 品:取 样 品25g(精确到0,01g),加入 5g 聚乙二醇(4.3),用水定容至1O0.0m L,高速搅拌提取2m i n。定量滤纸过滤后,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收 集滤液C于干净的容器中。6.2 净化将免疫亲和柱连接于玻璃注射器(5.5)下,准 确移取6.l 中滤液A或B或C2,0m L,注人玻璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力,使溶液以约1滴/s 的流速通过免疫亲和柱,直至空气进人亲和柱 中。用5m L PBS清洗缓 冲液(4,4)和5m I水先后 淋洗免疫 亲 和柱,流 速 约为1滴/s 2滴/s,直 至空气进人亲和柱 中,弃去全部流出液,抽干小柱。6.3 洗脱准确加人1,0m L甲醇洗脱,流 速约为1滴/s,收 集全部洗脱液于干净的玻璃试管中,HPLC测定。6.4 高效液相色谱参考条件a)色谱柱:C】:柱,5 u m,1 5 0 m m 厶.6 m m 或相当者;b)流动相:甲 醇+水(20+80);c)流速:0.8 mL/min;d)柱温:35;e)进样量:5 0 uL;f)检测波长:218n m。6.5 定量测定以脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液浓度为横坐标,以 峰面积积分值为纵坐标,绘 制标准工作 曲线,用标准工作曲线对试样进行定量,标准工作溶液和试样溶液 中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色谱条件下,脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品色谱图参见图A.1。6.6 空白试验除不加试样外,空 白试验应与测定平行进行,并采用相 同的分析步骤。6.7 平行试验按 以上步骤,对 同一试样进行平行试验测定。7 结果计算试样 中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量按式(1)计算:2食品伙伴网http:/GB/T23503一009x=r(1)勿式中:X一 试样 中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量,单位为毫克每千克(m 酽 k g);c l-试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度,单位为微克每毫升(u g/m D;c O 空白试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度,单位为微克每毫升(u g/m L);V 一甲醇洗脱液体积,单位为毫升(m L);叨一 试样的质量,单位为克(g);一 稀释倍数。检测结果以两次测定值的算术平均值表示。计算结果表示到小数点后1位。8 回收率添加浓度在0.5 mg/kg2.O mg/kg时,回收率在7 0%1 o0%之问。重复性在重复性条件下,获得的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的两次独立测试结果 的绝对差值不大于其算术平均值的10%。食品伙伴网http:/GB/T235032009o0o叩I曲o卜臼0附 录 A(资 料性 附录)脱 氧 雪腐镰 刀菌烯醇标准品的液相色谱 图图A。1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品液相色谱图m涨卜卜H叫GB/T 235032009H期:09年 6丿J1H版权专有 侵权必究书 号:1 5 5 0 6 6 3 6 9 5 2UV VIS打 印定价:1 4.0 0 元食品伙伴网http:/