GBT 22973-2008 牛奶和奶粉中醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

GB/T22973-2008过装有15g无水硫酸钠的玻璃柱过滤到50mL具塞聚丙烯离心管中。再用8mL乙酸乙酯(4.4)和8mL石油醚(4.11)重复提取残液一次，以4000r/min离心5min,提取液过相同的无水疏酸钠的玻璃柱，用5mL乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱后，合并提取液，提取液于60用氮气浓缩仪吹干。加入5mL乙腈，于60水浴中保持3min,使脂肪融化。涡旋1min,于一5以4000r/min离心7min,吸取上清液至l5mL具塞聚丙烯离心管中，再向沉淀物中加入5mL乙腈重复提取一次，合并上清液。向合并的乙腈提取液中加入2mL正己烷(4.5)，涡旋1min,于一5以4000r/min离心5mi,弃去正己烷层，再用2mL正己烷重复洗涤乙腈相，弃去正己烷层。乙腈提取液于60用氮气浓缩仪吹干。7.3皂化向乙腈提取液(7.2)中依次加入4mL正已烷(4.5)、1mL氢氧化钠溶液(4.16)和0.5mL氯化镁溶液(4.15)，于液体混匀器上快速混匀10s,在60水浴中保持15min,于一5以4000r/min离心5mi,吸取上清液至15mL离心管中。向沉淀物中再加入4mL正己烷，混匀，于60水浴中加热15min后，于-5以4000r/min离心5min,合并上清液。于60用氮气浓缩仪吹干，用1.0mL正已烷溶解残渣，待净化。7.4净化将上述样液(7.3)移人氰丙基固相萃取柱中(4.23)，用2mL正己烷分两次润洗玻璃试管，洗液也移人固相萃取柱中。待样液流出后，依次用5mL正己烷和6mL乙酸乙酯+正己烷溶液(1+19)(4.13)淋洗固相萃取柱，淋洗液流出后，固相萃取柱抽干2mi,最后用3.5mL乙酸乙酯+正己烷溶液(1+4)(4.14)洗脱，洗脱液收集于另一15mL离心管中，于60用氮气浓缩仪吹干。残余物用1mL乙腈+水(7+3)(4.17)涡旋溶解，过滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。7.5测定条件7.5.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C1g柱，3m,50mm2.0mm(内径)或相当者；b)柱温：30：c)流速：0.3mL/min;d)进样量：10L;e)梯度洗脱，洗脱程序见表1。表1液相色谱梯度洗脱程序时间/min0.1%甲酸水溶液/%乙腈含0.1%甲酸/%090101.020807.0品808.090107.5.2质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：正离子电喷雾；b)扫描方式：多反应检测MRM;c)电喷雾电压：4000V;d)离子源温度：350；)雾化气、气帘气、辅助气：均为高纯氮气，使用前调节各气流流量，以使质谱仪灵敏度达到检测要求；D定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表2。3