GBT 22990-2008 牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-紫外检测法.pdf

GB/T22990-2008牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法1范围本标准规定了牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量液相色谱紫外检测测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中土霉素、四环素为54g/kg、金霉素、强力霉素为104g/kg。奶粉中土霉素、四环素为254g/kg、金霉素、强力霉素为504g/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T6379.12004,IS05725-1:1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004，IS05725-2:1994,IDT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008，IS03696:1987,MOD)3原理用0.lmol/L Naz EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取试样中四环素族抗生素残留，Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)。4.4柠檬酸(CsHO,H2O)。4.5乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA2H2O).4.6草酸(C2H2O42H2O)。4.70.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取71.63g磷酸氢二钠(4.3)，用水溶解，定容至1000mL。4.80.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.04g柠檬酸(4.4)，用水溶解，定容至1000mL。4.9 Mellvaine缓冲溶液：将625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液(4.7)与1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液(4.8)混合，必要时用NaOH或HCl调pH=4.0士0.05。4.100.1mol/L Na:EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.50g乙二胺四乙酸二钠(4.5)放入1625mLMellvaine缓冲溶液(4.9)中，使其溶解，摇匀。GB/T22990-20084.110.01mol/L草酸溶液：称取1.26g草酸(4.6)，用水溶解，定容至1000mL。4.12甲醇-水(1+19)：量取5mL甲醇(4.1)与95mL水混匀.4.130.01mol/L草酸-乙腈溶液(1+1)：量取50mL草酸溶液(4.11)与50mL乙腈(4.2)混匀。4.14土霉素(oxytetracycline.,CAS:2058-46-0)、四环素(tetracycline,CAS:64-75-5)、金霉素(chlortet-racycline,CAS:64-72-2)、强力霉素(doxycycline,CAS:24390-14-5)标准物质：纯度大于等于96%。4.150.1mg/mL土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备溶液：准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质(4.14)，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液于一20保存。4.16土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液：根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备液(4.15)稀释成所需浓度的混合标准工作溶液，储存于冰箱中，每周配制。4.17 Oasis HLB固相萃取柱”或相当者：500mg,6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。4.18羧酸型阳离子交换柱：500mg,6mL。使用前用5mL甲醇预处理，保持柱体湿润。5仪器5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。5.2分析天平：感量0.1mg,0.01g。5.3涡旋振荡器。5.4冷冻离心机：转速大于5000r/min。5.5固相萃取装置。5.6真空泵。5.7氮气吹干仪。5.8pH计：测量精度士0.02。5.9刻度样品管：10mL,精度为0.1mL。6试样的制备与保存6.1试样的制备将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。6.2试样保存牛奶置于04冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。7测定步骤7.1提取牛奶试样称取10g(精确到0.01g),置于50mL具塞塑料离心管中。奶粉试样称取2g(精确到0.01g),置于50mL具塞塑料离心管中。向试样中加入20mL0.1mol/LNa2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.10)，于涡旋振荡器上混合2min,于10，5000r/min离心10min,上清液过滤至另一离心管中。残渣中再加入20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。7.2净化将上清液(7.1)通过处理好的0 asis HLB柱(4.17)，待上清液完全流出后，用5mL甲醇-水(4.12)淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5min,最后用5mL甲醇(4.1)洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中。1)Oasis HLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。