GBT 21107-2007 动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法 PCR方法.pdf

GB/T21107-2007phate,脱氧胸苷三磷酸)、dCTP(deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸)、dGTP(deoxyguanosinetriphosphate,.脱氧鸟苷三磷酸)。5.5琼脂糖：电泳纯。5.6溴化乙锭。5.7三氯甲烷。5.8异丙醇。5.970%乙醇。5.10分子量标准品(100bp2000bp)(bp:base pair,碱基对)。5.11裂解液：l%CTAB(cetyltrithylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，0.05mol/L Tris-HCl(pH8.O)Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三（羟甲基）氢基甲烷，O.7mol/L NaCl,.0.01mol/L EDTA(pH8.0)(ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸)。5.12TE缓冲液(Tris-HCl、EDTA级冲液)：10mmol/L Tris-HCl(pH8.0),1mmol/L EDTA(pH8.0)。5.1310PCR缓冲液：100mmol/LKCl,160mmol/L(NH4)zSO4,20mmol/L MgSO4,200mmol/LTris-HCl(pH8.8),l%Triton X-l00(t-octylphenoxypolyethoxyethanol,辛基苯氧基聚乙氧乙醇)，1mg/mL BSA(bovine serum albumin,牛血清蛋白)。5.14电泳缓冲液：Tis54g,酸27.5g,0.5mol/LTE缓冲液(pH8.0)20mL,加蒸馏水至1000mL使用时10倍稀释。5.15溴化乙锭贮存液：10mg/mL水溶液。5.16加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，40%（质量浓度）蔗糖。5.17酶切缓冲液：10mmol/LTis-HC1(pH7.5),l0mmol/L MeCl2,50 mmnol/L NaCl,0.1mg/IL BSA。6仪器设备6.1DNA热循环仪，6.2离心机（离心力12000g)。6.3核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.4微量移液器(0.1L2L,0.5L10L,24L204L,10L100L,20L2004L,200L1000L)。6.5电泳仪.6.6紫外检测仪。6.7pH计。6.8恒温水浴锅。6.9天平（感量0.01g)。7试样选取与制备按照GB/T14699.1采样，将实验室样品粉碎，充分混合均匀后待用。8检验步骤8.1样品的总DNA提取称取适量饲料（饲料粒度为20目称取200mg,60目称取100mg,100目称取50mg)于1.5mL离心管中，加人600L800L裂解液，6530min,期间不时振荡混匀，12000g离心5min;转移上清于洁净离心管中，加400L三氯甲烷+异戊醇(24+1)，混匀；12000g离心5min,取上清液；加0.8倍体积异丙醇，沉淀；12000g离心5min,弃上清液；70%乙醇洗涤一次，晾干；加人50uLTE,溶解沉淀。