GBT 21108-2007 饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法.pdf

GB/T21108一2007前言本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标淮化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：赵根龙、高生、宋荣、张发旺。本标准首次发布。GB/T21108-2007饲料中氯霉素的测定高效液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了测定饲料中氯霉素的高效液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)。本标准适用于配合饲料和预混合饲料中氯霉素的测定，其最低定量限为10g/kg,最低检测浓度为5g/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1-2005,IS06497:2002,DT)3原理饲料中的氯霉素用乙酸乙酯提取，取部分提取液用氮气吹干。残渣溶于甲醇氯化钠溶液，用正己烷萃取除去脂溶性杂质。再将氯霉素回提至乙酸乙酯，吹干。用乙腈水溶液溶解，过C8小柱净化。最后用LC/MS/MS法分离、检测和定量。4试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T6682的一级用水的规定。4.1乙腈：色谱纯。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙酸乙酯。4.4正己烷。4.5三氯甲烷。4.6乙腈溶液4.6.1乙腈溶液I:取5.0mL乙腈加水95mL。4.6.2乙腈溶液：吸取乙腈50mL加水50mL.4.7氯化钠。4.8氯化钠溶液：浓度为40g/L,称取40.0g氯化钠(4.7)加水溶解定容到1000mL。4.9氯化钠甲醇溶液：取200mL甲醇(4.2)加氯化钠溶液(4.8)800mL。4.10氯霉素标谁品：纯度大于98%。4.11氯霉素标准液4.11.1标准贮备液：准确称取100mg士0.1mg氯霉素标准品(4.10)用乙腈溶解，定容到100mL,该溶液氯霉素浓度为1mg/mL,密封贮于冰箱内，有效期为一年。4.11.2标准中间液I:吸取标准贮备液(4.11.1)5.00mL,于50mL容量瓶内，用乙腈溶液(4.6.2)定容至50mL,该溶液氯霉素浓度为100g/mL,密封贮于冰箱内，有效期3个月。1GB/T21108-2007柱温：室温。流动相组成：乙睛+水=30+70(V1+V2)。流动相流速：250L/min。进样量：10L。7.3.2质谱条件电喷雾离子源(ESI)负离子方式检测喷雾电压：3500V。壳气流速：0.68L/min。辅助气流速：3.6L/min。毛细管温度：300。母离于公NN2.121.碰撞电如装母离子321，二级子离表1氯露素的子离子及其碰撞电压子离碰撞压力/eVOF32257231521812127.3.3试样的在上述仪下，分别注入标准工作液(4.11.5)和试样溶液(7.2.2)10L,以保留时间和二级子离子(m/z)257121进行定性，其相对丰度比见表2。以152作为定量子离子，并用氯霉素标准工作液做单点或运交准，以峰面积此较进行定量计算。0表2氯霉素的子离子及相对丰度比子离手m/z257121相对丰1009018848结果计算与表8.1结果计算VaN试样中氯霉素的含以质量分数微克每千克(4g/kg)表示，单点校淮时可用式(1)计算：Y-P2VXcV2XP1XmxV(1)式中：P2试样溶液对应的色谱峰面积响应值；V一加入定容液的体积，单位为毫升(m万氯霉素标准溶液的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V2一氯霉素标准溶液的进样体积，单位为微升（L)；稀释倍数；P氯霉素标准溶液对应的色谱峰面积响应值m试样质量，单位为克(g)；V一试样溶液的进样体积，单位为微升(L)。多点校准时可用式(2)计算：X=ViXcXV:Xnm X V30555*055(2)