GBT 22941-2008 蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐霉素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

中 华 人民 共 和国 国 家 标 准GB/T2294-2008冖罗卸 y蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法De t e r l i n a t i o n o f】i n c o m y c i n,e r y t h r o m y c i n,s p i r a m y c i n,t i l In i c o s i n,t y l o s i n,j o s a m y c i n,k i t a s a m y c i n,o Ie a n d o m y c i n r e s i d u e s i n h o n e y LC-Ms-r s m e t h。d20O8-131发布2009-05-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验检嫖总垦 发布中 国 国 家 标 准 化 管 理GB/T2294-2008目 刂 舀本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准 由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位:中华人 民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人:曹彦忠、张艳梅、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。GB/T2294-2008蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定 了蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜 中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残 留量的测定。本标准的方法检 出限均为2.0u y k g。2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期 的引用文仵,其 随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或 修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件 的最新版本。凡是不注 日期 的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1 测量 方 法 与 结 果 的 准 确 度(正 确 度 与 精 密 度)第1部分:总 则 与 定 义(GB/T6379.-2004,ISo 5725-1:1994,IDT)GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确 定标准测量方法重复性 与 再 现 性 的 基 本 方 法(G B/T 6 3 7 9.2 2 0 0 4,I s O 5 7 2 5 乇:1 9 9 4,I D T)G W T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法(G B/T 6 6 8 2 0 8,I S o 3 6 9 6:1 9 8 7,M O D)3 原理蜂蜜中残 留的林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素用三羟甲基氨基 甲烷(Tr i s)缓冲溶液(p H=9)提取,过滤后,经 Oa s i s HLB固相萃取柱D或相 当的固相萃取柱净化,用 甲醇洗脱并蒸干,残渣用乙腈0.01m o l/L乙酸铵溶液溶解,过0.2u m 滤膜后,样 品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。4 试剂和材料4.1 水:G B/T 6 6 8 2,一级。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 乙腈:色谱纯。4.4 三羟 甲基氨基 甲烷(Tr i s):优级纯。4.5 氯化钙(C ac1 2 2 H 2 0):优级纯。4.6 乙酸铵:优 级纯。l)Oa s i s HIB固相萃取柱是Wa t c r s 公司产 品的商品名称,给 出这一信息是 为 了方便本 标准的使 用者,并 不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则 可使用这些等效产 品。GB/T22941-20084.7 盐酸:优级纯。4.8 淋洗液:甲 醇溶液(2+3)。量取40m L甲醇(4.2)与60m L水混合。4.9 0.0 1 ml/L 乙酸铵溶液:称取0.7 7 g乙酸铵(4,6)溶于1 0 0 0 mL 水中。4.10 0.2m o l/L三羟 甲基氨基 甲烷(To s)缓冲溶液:称 取12.0g 三羟 甲基氨基 甲烷(4,4)和7.35g氯化钙(4.5),放入 1000m L烧杯 中,加人800m L水溶解,用盐酸(4.7)调至 p H值为9.0,再用水定容至1000m L。4.11 定容液:乙腈o.01m o l/L乙酸铵溶液(3+17)。量取15m L乙腈(4.3)和85m L乙酸铵溶液(4.9)混合均匀。4.1 2 标准 物 质:林可 霉 素(C A S:7 1 7 9 4 9 9)、红霉 素(C A S:5 9 3 1 9 7 2)、螺 旋 霉 素(C A S:8 0 2 5 鹉1 胡)、替 米 考 星(C A S:1 0 8 0 5 O-5 4 0)、泰 乐 菌 素(C A s:7 4 6 1 5 5 2)、交 沙 霉 素(C A S:1 6 8 4 6-2 4 5)、吉 他 霉素(C A S:1 3 9 2 2 8)、竹 桃 霉 素(C A S:7 0 6 0 彳4 4),纯度 9 9%。4.13 0.1m g/m L标准储备溶液:准确称取适量的各标准物质(在.12),用甲醇分别配成0.1m g/m L的标准储各溶液。该溶液在4保存。4.14 1,0u g/m L混合标准工作溶液:吸取各标准储各溶液(4.13)0.l m I移至10m L容量瓶 中,用 甲醇稀释至刻度。该溶液在4保存。4.1 5 内标 物 质:罗红霉 素(C A S:8 0 2 1 4 8 3)、克 林 霉 素(C A S:2 1 4 6 2 3 9-5),纯度 9 9%。4.16 0.1m y m L罗红霉素、克林霉素 内标储各溶液:准 确称取适量的罗红霉素、克林霉素标准物质(4.15),用甲醇配成0.l m g/m L的内标储备溶液。该溶液在座保存。4.17 1.0u g/m L混合 内标工作溶液:分别 吸取罗红霉素和克林霉素 内标储备溶液(4.16)0.1m L移至10m L容量瓶 中,用 甲醇稀释至刻度。该溶液在4保存。4.18 基质标准工作溶液:吸取不 同体积混合标准工作溶液(4.14)和20u L混合 内标工作溶液(4.17),用空白样品提取液配成2.0 ng/mL、5.O ng/mL、1 0.0 n酽mL、zO.0 ng/mL、5 0.0 ng/mL 不同浓度的基质标准工作溶液。当天配制。4.19 0a s i s HLB固相萃取柱或相当者:0m g,6m L。使用前依次用5m L甲醇(4.2)和10m L水活化,保 持柱体湿润。4.2 0 滤膜:0.2 um。5 仪器5.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2 分析天平:感量0.1 mg和0.O l g。5.3 氮气浓缩仪。5.4 液体混匀器。5,5 贮液器:5 0 mL。5.6 真空泵:最大负压 80k Pa。5.7 固相萃取装置。5.8 吹干管:1 0 mL。6 试样的制备与保存6.1 试样的制备对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀。对有结品的样品,在密闭情况下,置 于不超过60的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,冷却至室温。分出0.5k g 作为试样。制备好的试样置于样 品瓶2GB/T2294-2008中,密封,并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。7 测定步骤7.1 提取称取2g 试样,精确至0.01g。置于150m L三角瓶中,加入20u L混合 内标工作溶液(4.17),加人25m L Ts 缓冲溶液(4.10),于液体混匀器(5.4)上快速混匀1m i n,使试样完全溶解。7.2 净化将塞有玻璃棉 的玻璃贮液器(5.5)连到0a s i s HLB固相萃取柱(4.19)上,把 样液倒人玻璃贮液器中,调节流速小于3m L/m i n,待样液完全流出后,依 次用5m L水和5m L淋洗液(4.8)洗柱,弃 去全部流出液。减压抽干20m i n,然后用5m L甲醇(4.2)洗脱,收集洗脱液于10m L吹干管(5.8)中。用氮气浓缩仪(5.3)于50吹干。准确加人1.0m L定容液(4.11)溶解残渣,过 0.2u m 滤膜后,供 液相色谱-串联质谱仪测定。按上述操作步骤,制备用于配制系列基质标准工作溶液的样品空 白提取液。7.3 测定条件7.3.1 液相色谱参考条件a)色谱柱:A t l a n t i s C 1:,3 u m,1 5 0 m m 2。l m m(内径)或相当者;b)流速:0.2 m L/m i n;c)柱温:30;d)进样 量:2 0 u L;e)流动相:A:乙腈,B:0.1%甲酸溶液,C:甲醇。梯度洗脱条件见表l。表1 梯度洗脱条件7.3,2 质谱参考条件a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测;d)电喷 雾 电 压:5 5 0 0 V;e)雾化气压力:0.0 6 9 M P a;f)气帘气压力:0.0 6 9 M P a;g)辅助气流速:7L/m i n;h)离子源温度:450;i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇 电压见表2。时间/m i n/%B/%C/%0.0090.05.05.05.05.09 005.05.09 1090.05.05.017.o5.0化合物中文名称化合物英文名称定性离子对(m/z)定量 离 子对(乃 n/z)碰撞 气能量/V去簇 电压/V林可霉素lincomycin407/126407/359407/1263 72 4红霉素erythromycin688/158688/5座 4688/1584 22 3螺旋霉素s p 1r a m y c l n734/158734/576734/1584 22 8替米考星tilmicosin869/174869/132869/1746 27 0泰乐菌素tylosin916/174916/145916/1745 45 5交沙霉素Jo s a r n y c l n425/126425/377425/1264 52 55 35 3吉他霉素kitasamycin843/142843/17衽8衽 3/1424 85 0竹桃霉素oleandomycin772/215772/109772/2154 27 0GB/T2294-2008表2 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇 电压7.4 液相色谱-串联质谱测定7.4.1 定性测定被测组分选择1个母离子,2个以上子离子,在 相同的试验条件下,样 品中待测物质 的保 留时间与标准溶液中对应的保 留时问偏差在2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行 比较,若偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在对应的待测物。表3 定性确证 时相对离子丰度的最大允许偏差以%表示7.4.2 定量测定在仪器的最佳工作条件下,用基质标准工作溶液(4.18)分别进样,以各标准溶液 中被测组分峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标,以各标准溶液被测组分浓度与内标物浓度的比值为横坐标,绘制标准工作 曲线,用标准工作 曲线对样品进行定量。样品溶液屮林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的响应值均应在仪器测定 的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下,林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素的参考保 留时间见表4。林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素 的标准物质多反应监测(MRM)色谱 图参见附录A中的图.1。本方法的添加平均 回收率数据参见附录B中的表B。1。表4 林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉参考保留时间相对离子丰度)5020(5010(K(201 0允许最大偏差2025 30 50化合物名称保留时闸/m i n