GBT 22963-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

GB/T22963-20087测定步骤7.1混合基质标准校准溶液的制备7.1.1样品称取称取5个阴性样品，每个样品为5g(精确到0.1g),将上述样品置于50mL离心管(5.10)中，分别加入适量混合标准工作溶液(4.18)，使各被测组分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雕酚和双烯雌酚的浓度分别为2.5ng/mL、5.0ng/mL、l0ng/mL、25ng/mL、50ng/mL。再分别加入适量内标标准工作溶液(4.20)，使其浓度均为10ng/mL。7.1.2提取加入20mL叔丁基甲基醚(4.2)，在10000r/min均质1min。3000r/min离心5min,将上清液全部转移至另一50mL具塞离心管(5.10)中备用。离心管中的残渣置于通风橱中挥发30min,加入15mL乙酸盐缓冲液(4.12)，高速均质1min,3000r/min离心5min,将上清液全部转移至另一25mL具塞试管(5.10)中，并在氮吹仪上于40水浴中吹去残余叔丁基甲基醚后，加入80L葡糖苷酸酶(4.16)混匀，于52烘箱中放置过夜。在此缓冲溶液中加入氢氧化钠溶液(4.11)将溶液pH值调至7，加入10mL叔丁基甲基醚，充分混合，3000r/min离心2min。移取叔丁基甲基醚层与前述的叔丁基甲基醚提取液混合，在氨吹仪上于40水浴中吹干。加入1mL溶解液(4.13)，涡旋30s溶解，待净化。7.1.3净化固相萃取净化条件：用6mL正己烷分两次预洗硅胶柱(4.23)，流速均为4mL/min。上样，流速为2mL/min,在样品试管中加入3mL淋洗液(4.l4),混合后过柱，流速为2mL/min,用3mL淋洗液以3mL/min的速度淋洗，加入2mL空气以4mL/min的速度吹过硅胶柱。用6mL洗脱液(4.l5)洗脱，流速为2mL/min,加入2mL空气以6mL/min的速度吹过硅胶柱，收集洗脱液。将洗脱液在氨吹仪上于40水浴中吹干，加入1mL流动相，涡旋30s溶解。溶液过0.2m滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定.7.2实测样品溶液的制备称取待测样品5g(精确到0.1g)于50mL离心管中，加入内标工作溶液，使其最终定容浓度均为10ng/mL。按7.1.2和7.1.3操作。7.3空白基质溶液的制备称取阴性样品5g(精确到0.1g)于50mL离心管中，按7.1.2和7.1.3操作。7.4测定条件7.4.1液相色谱参考条件a)色谱柱：ZORBAX Eclipse SB-C8,3.5um,150mm4.6mm(内径)或相当者；b)柱温：25；c)流动相：乙腈-水(7+3)：d)流速：0.5mL/mine)进样量：50uL.7.4.2质谱参考条件a)离子化方式：电喷雾电离；b)扫描方式：负离子扫描；c)检测方式：多反应监测(MRM);d)离子源温度：350；