ICS07C53100.30(ria中华人民共和国国家标准GB/T19915.6-2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofStreptococcussuis2005-09-27发布2005-11-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T19915.6-2005前言本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中国兽医药品监察所。本标准主要起草人:张鹤晓、宋立、高志强、宁宜宝、周琦、乔彩霞、杨承槐、吴丹、谷强。本标准系首次发布的国家标准。GB/T19915.6-2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法范围本标准规定了猪源链球菌通用荧光PCR检测方法。本标准适用于增菌培养物、疑似病料及生猪拭子、猪组织样品中猪源链球菌的检测。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法缩略语本标准采用下列缩略语:荧光PCR荧光聚合酶链式反应Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的闽值时所经历的循环圈数DNA脱氧核糖核酸Taq酶TaqDNA聚合酶PBS磷酸盐缓冲生理盐水原理采用TagMan方法，在比对猪源链球菌16SrDNA基因序列的基础上，设计针对该基因的特异性引物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5'端标记FAM荧光素为报告荧光基团(用R表示)，3'端标记TAMRA荧光素为淬灭荧光基团(用Q表示)，它在近距离内能吸收5'端荧光基团发出的荧光信号。PCR反应进人退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收，仪器检测不到荧光信号;而反应进行到延伸阶段时，Taq酶的5'-3’的外切核酸酶功能将探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系。猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设It与管理猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设置与管理见GB/T19438.1-2004中附录C.试荆和材料6.1试剂除另有说明，所用试剂均为分析纯。6.1.1无水乙醇:-20℃预冷。6.1.275%乙醇:用新开启...
