ICS11.220B41中华人民共和国国家标准GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术Diagnostictechniquesforhighlypathogenicavianinfluenza2003一01一10发布2003一05一01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布GB/T18936-2003目9舀高致病性禽流感(highlypathogenicavianinfluenza，简称HPAI)是由正猫病毒科流感病毒属中的A型流感病毒引起的，被世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeInter-nationaldesEpizooties(法),OIE〕列为A类疾病，我国将其列为一类动物疫病。本标准是参考OIE《诊断试验和疫苗标准手册》(200。年版)，并结合我国现有动物卫生法规及农业部对禽流感的相关政策和措施制定的。本标准的附录B、附录C、附录D、附录E、附录F为规范性附录，附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准起草人:唐秀英、李海燕、田国斌。GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术范围本标准规定了高致病性禽流感(HPAD病毒分离与鉴定技术、血凝(HA)和血梁抑制(HI)试验、琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验、酶联免疫吸附试验(间接ELISA)的技术要求。本标准所规定的高致病性禽流感病毒分离与鉴定技术适用于各种禽类高致病性禽流感的病原分离和鉴定;AGID和间接ELISA适用于A型禽流感病毒的型特异性检验:HA-HI试验适用于禽流感病毒的血凝素亚型鉴定。2病毒分离和鉴定技术2.1材料准备2.1.1病料的采集:死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品，进行分别处理或者同时处理;活禽病料应包括气管或泄殖腔拭子，尤其是以采集气管拭子更好;小珍禽用拭子取样易造成损伤，可采集新鲜粪便。2.1.2病料的保存:病料应放在含有抗菌素的pH值7.0-7.4的等渗磷酸盐缓冲液(PBS)内(无PBS可用25%^50%的甘油盐水)。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中应含有青霉素(2000IU/mL),链霉素(2mg/ml-)、庆大霉素(50pg/ml-)和制霉菌素(1000IU/ml)，但粪便和泄殖腔拭子所有的抗生素浓度应提高5倍，加人抗生素后pH值应调至7.0-7.4。在室温放置1h---2h后样品应尽快处理，没有条件的可在4'C存放几天，也可于低温条件下保存(-70`C贮存最好)。2.1.3病料的处理:将棉拭子充分捻动、拧干后弃去拭子;粪便、研碎的组织用含抗生素的pH值7.0-7.4的等渗PBS溶液配成10写^-20%(g/mL)的悬液。样品液经1000r/min离心10min，取上清液作为接种材料。22病毒分离2.2....
