GBT 5009.108-2003 畜禽肉中己烯雌酚的测定.pdf

GB/T5009.108-2003畜禽肉中己烯雌酚的测定1范围本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)方法测定畜禽肉中己矫雌酚残留。本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留盘测定。检出限0.25mg/kg。2原理试样匀浆后，经甲醇提取过滤，注人HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度，同杀件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。3试剂3.1甲醇3.20.043mol/L磷酸二氢钠(NaH2 PO,2H2O)取1g磷酸二氢钠溶于水成500mL。3.3磷酸3.4己烯雕酚(DES)标准溶液：精密称取100mg己烯雌酚(DES)溶于甲醇，移人100mL容赴瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1.0mg,贮于冰箱中。3.5己烯雌酚(DES)标准使用液：吸取10.00 mL DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1004g。4仪器4.1高效液相色谱仪：具紫外检测器。4.2小型绞肉机.4.3小型粉碎机。4.4电动振荡机。4.5离心机。5分析步骤5.1提取及净化称取5g(士0.1g)绞碎（小于5mm)肉试样，放入50ml.具塞离心管中，加10.00mL甲醇，充分搅拌，振荡20min,于3000r/min离心10min,将上清液移出，残渣中再加10.00mL甲醇，混匀后振荡20min,于3000r/min离心l0min,合并上清液，此时若出现混浊，需再离心10min,取上清液过0.54mFH滤膜，备用。5.2色谱条件5.2.1紫外检测器：检测波长230nm。5.2.2灵敏度：0.04AUFS。5.2.3流动相：甲醇+0.043mol/L.磷酸二氢钠(70+30)，用磷酸调pH=5(其中NaH:P0,2H2O水溶液需过0.454m滤膜)。5.2.4流速：1mL/min。5.2.5进样量：204L。37GB/T5009.108-20035.2.6色谱柱：CI.C0DS(Ca(5m)6.2mm150mm不锈钢柱。5.2.7柱温：室温。5.3标准曲线绘制称取5份（每份5.0g)绞碎的肉试样，放人50L具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液(6.0,12.0,18.0,24.04g/ml)各1.0ml,问时做空白。其中甲醇总量为20.00mL,使其测定浓度为0.00,0.30,0.60,0.90,1.20g/ml,按5.1处理方法提取备用。5.4测定分别取样20L,注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20l,注入HPIC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，Rt=8.235。5.5计算按下式让算：K=41000100010001000式中：X一试样中已烯雌酚含量，单位为毫克每千克(mg/kg);A一进样体积中己烯雌酚含量，单位为纳克(ng):一试样的质量，单位为克(g);V2一进样体积，单位为微升(l)；V1一试样甲醇提取液总体积，单位为茫升(mL)。5.6色谱图色谱图见图1。12.7184.3438.31一溶剂峰：2杂质修：3一己烯雌酚标准峰。图138