农业部2406号公告-8-2016 转基因动物及其产品成分检测 人乳铁蛋白基因（hLTF）定性PCR方法.pdf

农业部2406号公告一8一20165.51mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tis)溶解于800mL水中，用盐酸(HC1)调pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa(121)条件下灭菌20min.5.6TE缓冲液(pH8.0):分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液和2mL乙二铵四乙酸二钠溶液，加水定容至1000mL。在103.4kPa(121)条件下灭菌20min。5.750TAE缓冲液：称取242.2g三羟甲基氨基甲烷(Tis),先用500mL水加热搅拌溶解后，加入100mL乙二铵四乙酸二钠溶液，用冰乙酸调pH至8.0，然后加水定容到1000mL。使用时，用水稀释成1TAE5.8加样缓冲液：称取250.0mg溴酚蓝，加入10mL水，在室温下溶解12h;称取250.0mg二甲基苯腈蓝，加10mL水溶解；称取50.0g蔗糖，加30mL混合以上3种溶液，加水定容至100mL,在4下保存。混合商：将5.9DNA分子量标准：可清楚地区PUBLISHINA-1000bp的DNAnal1的dA、dTT、d种脱氧核糖核苷酸溶液等体积混合。5.11 Taq DNA聚合酶5.1210XPCR缓冲HCI(pH 8.3)100 mmal/L.K00 mmol/RES2 15 mmol/L.5.13hLTF基因引物正向引物hLTF反向引物LT)&预期扩增片大154bp(参见附录A)5.14内标准基引物根据样品米源选择对应的牛内标准基因（见农业部2032013)、羊内标准基因（见农部2122号公告一220140猪内标准基因（见农业部2122号公告12014),确定检测引物。5.15引物溶液用中液或水分别将引物稀释到105.16石蜡油。5.17动物基因组DNA取5.18定性PCR扩增试。d31N35.19PCR产物回收武剂盒人6主要仪器和设备6.1分析天平：感量0.1mg、感量0.01g。6.2涡旋微型离心机：最大相对离心力2000g。6.3微量紫外分光光度计：2ng/L15000ng。6.4PC扩增仪：升降温速度1.5/s,孔间温度差异1.0。6.5电泳槽、电泳仪等电泳装置。6.6凝胶成像系统。7分析步骤7.1DNA模板制备7.1.1DNA模板制备采用农业部2406号公告一7一2016的方法，测定并记录DNA在260nm和280nm的吸光度。将DNA适当稀释或浓缩，使其OD2so值在0.10.8的区间内。以1个OD26o值相当于