农业部781号公告-12-2006 牛奶中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

农业质量标准2 0 0 7年第3期1范围本标准规定了牛奶中9种磺胺类药物残留量的液相色谱-串联质谱(L C-MS/MS)确认检测方法。本标准适用于生鲜牛奶、巴氏杀菌乳、超高温瞬时灭菌乳(U H T灭菌乳)中磺胺类药物残留量的测定。本标准的方法检出限为0.2 g/L 5 g/L,定量限为1 0 g/L(见附录A)。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B/T6 6 8 2分析实验室用水规格和试验方法3原理待测样品中加入乙腈,沉淀牛奶中的蛋白,离心后取上清液用液相色谱串联质谱仪测定残留在滤液中的磺胺类药物,内标法定量。4试剂和材料4.1水:G B/T6 6 8 2,一级。4.2甲醇(C H3O H):色谱纯。4.3乙腈(C H3C N):色谱纯。4.4流动相:A液+B液(2 0+8 0)A液(含0.0 2%甲酸的乙腈溶液):吸取0.2m L甲酸(H C O O H)于10 0 0m L乙腈(4.3)中,充分摇匀,0.4 5 m滤膜(4.1 7)过滤;B液(0.0 2%甲酸):吸取0.2 m L甲酸(H C O O H)于1 0 0 0m L水中,充分摇匀,0.4 5 m滤膜(4.1 7)过滤。4.5磺胺嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.6磺胺二甲氧基嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.7磺胺二甲嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.8磺胺甲基嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.9磺胺甲氧嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.1 0磺胺甲基异唑标准物质:纯度9 9.5%。4.1 1磺胺吡啶标准物质:纯度9 8.0%。4.1 2磺胺二甲异嘧啶标准物质:纯度9 9.5%。4.1 3磺胺异唑标准物质:纯度9 9.5%。4.1 41 3C6-磺胺甲唑贮备液:每毫升含1 3C6-磺胺甲唑1 0 0 g的乙腈(4.3)溶液,贮存于4 的冰箱中,有效期2 4个月。4.1 5标准溶液4.1 5.1标准贮备液:准确称取各磺胺类药物标准物质(4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、4.1 0、4.1 1、4.1 2、4.1 3)1 0.0m g,分别用甲醇(4.2)溶解并定容至1 0 0 m L,混合均匀。该溶液每毫升分别含各标准物质1 0 0 g。贮存于4 的冰箱中,有效期3个月。4.1 5.2混合标准液:准确吸取 各 标 准 贮 备 液(4.1 5.1)0.5m L,用水稀释并定容至5 0m L混合均匀。该溶液每毫升含各标准物质1.0 g。贮存于4 的冰箱中,有效期1个月。4.1 5.3标准曲线工作液:准确吸取混合标准液(4.1 5.2)0.0、0.1、0.4、0.8、2.0、3.0m L,分别用阴性牛奶样品稀释并定容至1 0 m L,混合均匀。该溶液每毫升分别含各标准物质0、1 0、4 0、8 0、2 0 0、3 0 0 n g。临用前配制。4.1 6内 标 工 作 液:准 确 吸 取1 3C6-磺 胺 甲唑 贮 备 液(4.1 4)0.1 m L,用乙腈(4.3)稀释并定容至1 0 0 m L,混合均匀。该溶液每毫升含1 3C6-磺胺甲唑1 0 0n g。贮存于牛奶中磺胺类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法农业部7 8 1号公告1 22 0 0 6编者按:农业部7 8 1号公告1 22 0 0 6 牛奶中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法由农业部于2 0 0 6年1 2月1 6日发布并实施。本刊全文刊登如下,以飨广大读者。口恶口恶口恶口恶口恶口恶农业标准公告中华人民共和国国家标准4 0农业质量标准2 0 0 7年第3期4 的冰箱中,有效期3个月。4.1 7滤膜:水相,0.4 5 m。5仪器和设备5.1分析天平:感量0.0 0 0 0 1 g。5.2单刻线移液管:容量0.1m L、0.2m L、0.5m L、1.0m L、2.0 m L、5.0 m L。5.3容量瓶:容量1 0 m L、5 0 m L、1 0 0m L。5.4烧杯:容量1 0 0 m L。5.5聚丙烯塑料管:容量1.5 m L。5.6具塞离心管:1 0m L。5.7高速离心机:转速1 5 0 0 0 r/m i n。5.8涡流混合器。5.9液相色谱串联四极杆质谱仪:配有电喷雾离子源。6分析步骤6.1试样6.1.1贮藏在冰箱中的牛奶,应在试验前预先取出,与室温平衡后、摇匀待取样。6.1.2准确吸取0.1m L样品于洁净聚丙烯塑料管(5.5)中,加入0.1 m L内标工作液(4.1 6),用涡流混合器(5.8)混合5 s,以1 5 0 0 0 r/m i n离心1 m i n。6.1.3准确吸取0.1m L上层清液于洁净聚丙烯 塑 料 管(5.5)中,加人0.1m L乙腈(4.3),用涡流混合器(5.8)混合5 s,以1 5 0 0 0 r/m i n离心1 m i n。6.1.4准确吸取0.1m L上层清液于洁净聚丙烯 塑 料 管(5.5)中,加入0.1 m L水(4.1),用涡流混合器(5.8)混合5 s。取上清液,供液相色谱-串联质谱仪(5.9)测定。6.2标准工作溶液准确吸取0.1 m L各质量浓度标准曲线工作液(4.1 5.3),按步骤6.1.2 6.1.4操作,取上清液,供液相色谱串联质谱仪(5.9)测定。6.3液相色谱串联质谱测定6.3.1参考条件6.3.1.1液相色谱条件色谱柱:C1 8,5 m,1 0 c m 0.2 c m(i.d.),或性能相当者;预柱:C1 8,4.0 m m3.0 m m(i.d.),或性能相当者;流动相:按4.4方法配制、过滤;流速:0.3 m L/m i n;进样体积:2 0 L。6.3.1.2质谱条件离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;喷雾口位置:3:7;雾化气压力:0.3 3 MP a;气帘气压力:0.2 2 MP a;碰撞气压力:0.6 2 MP a;辅助气流速:6 L/m i n;离子源电压:3 5 0 0 V;离子源温度:4 0 0;监测离子对参见附录B。注:色谱、质谱条件可根据实际情况作相应调整。6.3.2各成分保留时间的确定在上述条件下,各磺胺类药物及内标物质的出峰顺序为:磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、1 3C6-磺胺甲唑、磺胺甲基异唑、磺胺异唑、磺胺二甲氧基嘧啶。9种磺胺类药物和内标物的参考保留时间参见附录B,L C-MS/MS质量色谱图参见附录C。6.3.3标准工作曲线的绘制准确吸取2 0 L处理后的各浓度标准工作液(6.2)分别进样,以各标准物质的质量浓度(g/L)为横坐标,各标准物质与1 3C6-磺胺甲唑的峰面积比值为纵坐标,分别绘制标准工作曲线。6.3.4样品测定准确吸取2 0 L处理后的待测样品溶液(6.1.4)进样,得到待测样品溶液中各磺胺类药物和1 3C6-磺胺甲唑的峰面积,用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中待测磺胺类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。6.4空白试验以阴性牛奶样品代替待测样品,按6.1 6.3步骤同时完成空白试验。7结果计算7.1标准工作曲线回归方程利用数据处理系统得到,形式如公式(1):式中:y标准工作液中各磺胺类标准物质定量离子峰面积与1 3C6-磺胺甲唑定量离子峰面积的比值;x标准工作液中各磺胺类标准物质的浓度,单位为微克每升(g/L);b标准工作曲线回归方程中的斜率;a标准工作曲线回归方程中的截距。7.2待测样品中各磺胺类药物的残留量按公式(2)计算:式中:X待测样品溶液中各磺胺类药物的残留量,单位为微克每升(g/L);Y待测样品溶液中各磺胺类药物定量离子峰面积与1 3C6-磺胺甲唑定量离子峰面积的比值。X=Y-#b)(2)口恶口恶口恶口恶口恶口恶y=b x+)a(1)口恶农业标准公告4 1农业质量标准2 0 0 7年第3期注:计算结果应扣除空白,用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后两位。8准确度和精密度8.1准确度本方法9种磺胺类药物的添加浓度为1 0 g/L 2 5 0 g/L时,相对回收率为8 5%1 1 5%。8.2精密度本方法的批间变异系数C V 1 5%。序号名称参考保留时间(m i n)定性离子对1定性离子对2定量离子对1磺胺二甲嘧啶1.0 22 7 9/1 4 92 7 9/1 8 62 7 9/1 2 42磺胺嘧啶1.7 92 5 1/1 0 82 5 1/1 5 62 5 1/9 23磺胺吡啶1.9 32 5 0/1 0 82 5 0/9 22 5 0/1 5 64磺胺甲基嘧啶2.2 22 6 5/1 5 62 6 5/1 7 22 6 5/9 25磺胺二甲异嘧啶2.6 32 7 9/1 4 92 7 9/1 8 62 7 9/1 2 46磺胺甲氧嘧啶3.0 82 8 1/1 0 82 8 1/9 22 8 1/1 5 67磺胺甲基异唑5.7 82 5 4/1 0 82 5 4/9 22 5 4/1 5 68磺胺异唑6.9 32 6 8/1 1 32 6 8/1 0 82 6 8/1 5 69磺胺二甲氧基嘧啶1 1.0 73 1 1/1 0 83 1 1/9 23 1 1/1 5 6内标1 3C6-磺胺甲唑5.7 62 6 0/9 22 6 0/1 0 82 6 0/1 6 2序号中文名称英文名称定量限(g/L)检出限(g/L)1磺胺二甲嘧啶S u l f a d i m i d i n e1 0.00.22磺胺嘧啶S u l f a d i a z i n e1 0.02.03磺胺吡啶S u l f a p y r i d i n e1 0.02.04磺胺甲基嘧啶S u l f a m e r a z i n e1 0.02.05磺胺二甲异嘧啶S u l f i s o m i d i n e1 0.01.06磺胺甲氧嘧啶S u l f a m e t e r1 0.03.07磺胺甲基异唑S u l f a m e t h o x a z o l e1 0.04.08磺胺异唑S u l f i s o x a z o l e1 0.05.09磺胺二甲氧基嘧啶S u l f a d i m e t h o x i n e1 0.02.0内标1 3C6-磺胺甲唑1 3C6-S u l f a m e t h o x a z o l e/口恶附录A(规范性附录)9种磺胺类药物中英文名称和方法定量限、检出限A.1 9种磺胺类药物中英文名称和方法定量限、检出限见表A.1。表A.19种磺胺类药物中英文名称和方法定量限、检出限附录B(资料性附录)L C-MS/MS测定的9种磺胺类药物和内标物监测离子对和保留时间B.1 L C-MS/MS测定的9种磺胺类药物和内标物监测离子对和保留时间参见表B.1。表B.1 L C-MS/MS测定的9种磺胺类药物和内标物监测离子对和保留时间口恶口恶口恶口恶口恶农业标准公告4 2农业质量标准2 0 0 7年第3期A.磺胺嘧啶F.磺胺甲基异唑B.磺胺二甲氧基嘧啶G.磺胺吡啶C.磺胺二甲嘧啶H.磺胺二甲异嘧啶D.磺胺甲基嘧啶I.磺胺异唑E.磺胺甲氧嘧啶I S.1 3C6-磺胺甲唑A.磺胺嘧啶F.磺胺甲基异唑B.磺胺二甲氧基嘧啶G.磺胺吡啶C.磺胺二甲嘧啶H.磺胺二甲异嘧啶D.磺胺甲基嘧啶I.磺胺异唑E.磺胺甲氧嘧啶I S.1 3C6-磺胺甲唑注:C.1空白牛奶的L C-MS/MS质量色谱图参见图C.1。T i m e,m i n1 0 05 00AI n t e n s i t y,c p sI n t e n s i t y,c p sI n t e n s i t y,c p s1 0 05 001 0 05 00EI1 0 01 0 01 0 01 0 01 0 01 0 01 0 05 05