GBT 7650-1987 谷物籽粒色氨酸测定法.pdf

中华 人 民共 和 国 国 家 标 准U D C 6 3 3.1-5 4 3-0 6谷物籽粒色氨酸测定法G B 7650一 87De t e r mi n a t i o n o f t r y p t o p h a n i n c e r e a l g r a i n s适用范围本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。原理 谷物蛋白质碱解后，降解成肤和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸叫噪环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。3 仪器、设备3.6分析夭平，感量。.1 m g,实验室用粉碎机。7 2 1 型分光光度计，或相当的仪器。离心机，4 0 0 0 r/m i n,培养箱。2 0 m l 具塞刻度玻璃试管(须校准).3.13.23.53.43.54 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4.1 浓盐酸(G B 6 2 2-7 7)，比重1.1 9,4.2 1 0%盐酸溶液:2 2.7 m l 浓盐酸加水至I O O M I,4.3 5%对二甲胺基苯甲醛(H G B 3 4 8 6-6 2)溶液:5 g 对二甲胺基苯甲醛溶于 1 0 外盐酸中，并定容1 0 0 m1,4.4 1 写硝酸钠(G B 6 3 6-7 7)水溶液(m/V),注:咯 冰箱中 保存，一周内使用有效。4.5 1 0%氢氧化钾(G B 2 3 0 6-8 0)水溶液(m/V),4.6 L 一 色氨酸，层析纯.4.7 L 一 色氨酸标准溶液:准确称2 5 m g L 一 色氨酸(1 0 5 C 干操2 h)，加少量 0.I m o l/L氢氧化钠(G B6 2 9-9 1)使之溶解，定It地转移到2 5 0 m!棕色容量瓶中，用水定容。浓度为1 0 0 u g/m i,注:4 冰箱中保存，一个月内使用有效.5 试样的选取与制备 5.1 选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于2 0 g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎(带壳籽粒先脱壳)，使9 5 以上通过。.2 5 m m孔径筛。6.2 按G B 2 9 0 6-8 2 谷类、油料作物种子粗脂肪测定法 脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风千后混匀，装入磨口瓶中备用.中华人民共和国农牧渔业部1 9 8 7 一 0 3 一 2 6 批准1 9 8 7 一 1 1 一 1 5 实施GB 7 6 5 0 一8 76 校准曲线的绘制 吸L 一 色氨酸标准溶液 0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7 m l 分别置于 2 0 m l 具塞刻度玻璃试管中，加 l m l1 0%氢氧化钾溶液，摇匀;加 0.2 m l 5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀;加。.2 m l 1%硝酸钠，摇匀;将试管置于冰水中，再加5 m l 浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入2 5 培养箱中显色7 5 m i n温度升到2 5 时记时)，取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在5 9 0 n m波长处测读吸光度。以色氨酸含量(11 8)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录Ae7 测定步驻 7.1 称样:称取 4 0 m g 试样两份，准确至0.l m g，与此同时，另称样品，按G B 3 5 2 3-8 3 谷类、油料作物种子水分测定法 测定水分含量。7.2 水解:将试样置于 2 0 m l 具塞刻度玻璃试管中，加 l m l 1 0%氢氧化钾，振摇，祥品全部湿润后，放入4 0 培养箱中水解 1 6-1 8 h.7.3 显色:从培养箱中取出试管冷至室温后加0.2 m l 5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀。加0.2 m l 1%硝酸钠，摇匀;将试管置于冰水中，再加5 m 1 浓盐酸。取出试管，强烈振摇后置于4 0 培养箱中显色4 5 m i n(温度升到 4 0 时记时)。7.4 测定:取出试管冷至室温后，用水稀释至刻度，摇匀。以4 0 0 0 r/m i n 离心l O m i n。取上清液以试剂空白作对照，在5 9 0 n m波长处测读吸光度。8 结果计算8.1计算公式 色氨酸，%(干基)二。试样质量,m g t。从校准曲线上查得的色氨酸含量,11 8 1H 试祥水分百分率.结果的衰示a X 1 0 m(1 一 H)义 1 0 0式中:8.2 两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留有效数字两位，第三位数按G B 1.1-8 1 标准化工作导则编写标准的一般规定 附录C规定取舍。8.3 允许理 两个平行样品色氨酸测定值为。.1 0%以下时，相对差允许为 8%;0.1 0%或 0.1 0%以上时为 5%o 为脱脂试样的色氮酸百分含A.换算成原样品的色氨酸含量应乘以系数 0一脂肪%)。如脂肪含量为4%以下时，二 个结果在允许差之内。GB 7 6 50 一8 7附录A(参考件)在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，L 一 色氨酸标准溶液的显色条件可采用3 0 C 6 0 m i n,测定结果与2 5 C 7 5 m i n 一致。附加说明:本标准由中国农业科学院分析室负责起草。本标准主要起草人崔淑文。