农业部2086号公告-7-2014 饲料中大观霉素的测定.pdf

农业部2086号公告一7一20144.2.1高效液相色谱：配蒸发光散射检测器。4.2.2涡旋振荡器。4.2.3离心机。4.2.4氮吹仪。4.2.5分析天平：感量0.1mg。4.2.6天平：感量0.01g。4.2.7固相萃取装置。4.3试样制备按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195规定的方法制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，避光低温保存，备用。4.4测定步骤4.4.1提取称取配合饲料2g(精确到0.01g),置于50mL塑料离心管中，加20mL提取液(4.1.5)，充分祸旋提取，l0000r/min离心5min,取上清液，残留物用l0ml提取液重复提取一次，合并上清液，混匀，做净化备用液。4.4.2净化阳离子固相萃取小柱依次用甲醇、水各5mL.活化，取备用液15mL过柱。依次用水、甲醇各5mL淋洗，抽干。用10%氨化甲醇(4.1.6)10mL洗脱，洗脱液40下氮气吹干，残余物用流动相1ml.溶解，涡旋溶解，过0.22m滤膜，定容至1ml,供高效液相色谱仪测定。4.4.3测定4.4.3.1色谱参考条件色谱柱：ASB Ci8柱，柱长250mm,柱内径4.6mm,粒径5m;或相当者。柱温：室温。进样量：20l。流动相：甲醇：0.05mol/L三氟乙酸溶液=5：95。流速：0.6mL/min。蒸发光检测器：漂移管温度为110，气体流速为2.5L/min。4.4.3.2定量测定在仪器最佳工作条件下，对标准工作液进样，采用与测试试样浓度接近的单点标准溶液外标法定量，或以标准工作液中被测组分峰面积为纵坐标、相应被测组分浓度为横坐标绘制工作曲线，用工作曲线对试样进行定量，试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。大观霉素标准工作液色谱图参见图A.14.5计算与表示4.5.1结果计算试样中大观霉素含量X以质量分数计，单位为毫克每千克(mg/kg),按式(1)计算。X=AXC.XVXV(1A,XmXV式中：A一试样溶液大观霉素的峰面积：A.一标准工作液大观霉素峰面积；C标准工作液大观霉素浓度，单位为微克每毫升(g/mL);V一一上机前最终定容体积，单位为毫升(mL);