GBT 36810-2018 草莓枯萎病菌检疫鉴定方法.pdf

GB/T36810-2018草莓枯萎病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了草莓枯萎病菌的检疫鉴定方法本标准适用于草莓苗中及其携带土壤中草莓枯萎病菌的检疫鉴定。2草莓枯萎病菌的基本信息中文名：草莓枯萎病菌学名：Fusarium oxysporum(Schlecht.)f.sp.fragariae Winks&.Williams英文名：fusarium wilt of strawberry分类地位：草莓枯菱病菌属真菌界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota),盘菌亚门(Pezizomycotina),粪壳菌纲(Sordariomycetes),肉座菌目(Hypocreales),丛赤壳科(Nectriaceae).,镰刀菌属(Fusarium)。传播途径：病菌依靠带菌种苗和土壤进行远距离传播。草莓枯萎病菌的其他信息参见附录A。3方法原理病原菌的为害症状、分离培养性状、形态特征及PCR特异性扩增片段作为草莓枯菱病菌的检疫鉴定依据。4仪器用具和主要试剂4.1仪器用具显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平、高压灭菌锅、常规冰箱（一20）。PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。培养皿、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、移液器、酒精灯。4.2主要试剂乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、Tis-HCl、异戊醇、三氯甲烷、无水乙醇、70%乙醇、氯化钾、氯化镁、蛋白酶K、引物FofraF/FofraR、Tag聚合酶等分子生物学试剂。或用植物组织及真菌基因组提取试剂盒提取DNA。蔗糖、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素、0.5%次氯酸钠(NaCIO)。马铃薯蔗糖培养基(PSA)、马铃薯葡萄糖培养基(PDA)的制备参见附录B。5病菌的鉴定5.1症状检查取待检植株，观察植株有无生长不良、矮小衰弱及腐烂症状，下部叶片是否变紫红色萎蔫，心叶是否