GBT 5009.29-1996 食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G s/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 6食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法代替 GB 5 0 0 9.2 9-8 5Me t h o d a c i df o r d e t e r mi n a t i o n o f s o r b i ca n d b e n z i o c a c i d i n f o o d s1 主肠内容与适用范围 本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定方法。本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定。最低检出浓度:气相色谱法最低检出量为1 p g，用于色谱分析的样品为 1 g时，最低检出浓度为1 m g/k g,第一篇气相色谱法(第一法)2 原理 样品酸化后，用乙 醚提取山 梨酸、苯甲 酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。3 试剂3 门乙醚:不含过氧化物。3.2 石油醚:沸程 3 0-V 6 0 C,3.3 盐酸。3.4 无水硫酸钠。3.5 盐酸(1+1):取1 0 0 m L盐酸，加水稀释至2 0 0 m L,3.6 氯化 钠酸 性溶液(4 0 g/L):于 氯化 钠溶液(4 0 g/L)中 加少量 盐酸(1+1)酸化。3.7 山梨酸、苯甲酸标准溶液:准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2 0 0 0 g，置于1 0 0 m L容量瓶中，用石油醚一 乙醚(3+1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升 相当于2.0 m g 山 梨酸或苯甲酸。3.8 山梨酸、苯甲酸标准使用液:吸取适量的山梨酸、苯甲 酸标准溶液，以石油醚一 乙醚(3+1)混合溶剂稀释至每毫升相当于5 0,1 0 0,1 5 0,2 0 0,2 5 0 m g山梨酸或苯甲 酸。4 仪器 气相色谱仪:具有氢火焰离子化检测器。5 分析步骤5.1 样品提取 称 取2.5 0 g 事先混合均匀的样品，置于2 5 m L带塞量筒中，加。5 m L盐酸(1+1)酸化，用 1 5,1 0 m L 乙醚提取两次，每次振摇 1 m i n，将上层乙醚提取液吸入另一个 2 5 m L-目 一一一一一一-.一.一一 一一.一一一中华人民共和国卫生部1 9 9 6 一 0 6 一 1 9 批准带塞量筒中。合并乙醚提 1 9 9 6 一 0 9 一 0 1 实施G B/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 6取液。用3 m L抓化 钠酸性溶液(4 0 g/L)洗涤两次，静止1 5 m i n，用滴管将乙 醚层通过无水硫酸钠滤入2 5 m L 容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取 5 m L乙醚提取液于 5 m L带塞刻度试管中，置4 0 水浴上挥干，加人2 m L石油醚一 乙醚(3 十1)混合溶剂溶解残渣，备用。5.2 色谱参考条件5.2.1 色谱柱:玻璃柱，内径3 m m，长2 m，内 装涂以5 0 0(m/m)D E G S+1 0 o(m/m)H,P O,固定液的6 0-8 0目C h r o mo s o r b W A W,5.2.2 气流速度:载气为氮气，5 0 m L/m i n(氮气和空气、氢气之比 按各仪器型号不同选择各自 的最佳比例条件)。5.2.3 温度:进样口2 3 0 0C;检测器2 3 0 0C;柱温1 7 0 C,5.3 测定 进样2 k L 标准系列中 各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲 酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2 ft L样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。5.4 计算x,m,x 1 0 0 0 SV,m,x2 5 X杯x 0 0 0。，.(1)式中:x 样品中山梨酸或苯甲 酸的含量,g/k g;m,测定用样品液中山 梨酸或苯甲 酸的质量，p g;V,加入石油醚一 乙 醚(3 十1)混合溶剂的 体积，m L;V z 测定时进样的体积，S L,m,样品的质量，9;5测定时吸取乙醚提取液的体积，mL;2 5 样品乙醚提取液的总体积,m L.由 测得苯甲酸的量乘以1.1 8，即为样品中苯甲酸钠的含量。结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。5.5 允许差 相对相差(l o 0 o,5.6 其他 在色谱图中山梨酸保留时间为2 分5 3 秒;苯甲 酸保留时间为6 分8 秒G B/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 6色谱图第二篇高效液相色谱法(第二法)6 原理 样品加温除去二氧化碳和乙 醉，调p H至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。7 试剂 方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。7.1 甲 醉:经滤膜(0.5 p m)过滤。7.2 稀氨水(1 十1):氨水加水等体积混合。7.3 乙酸馁溶液(0.0 2 m o l/L),称取1.5 4 g 乙酸按，加水至1 0 0 0 m L，溶解，经滤膜(0.4 5 ra m)过滤。7.4 碳酸氢钠溶液(2 0 g/L),称取2 g 碳酸氢钠(优级纯)。加水至1 0 0 m L，振摇溶解。7.5 苯甲酸标准储备溶液:准确称取。.1 0 0 0 8 苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(2 0 g/L)5 m L，加热溶解，移入1 0 0 m L容it瓶中，加水定容至1 0 0 m L，苯甲 酸含量为1 m g/m L，作为储备溶液。7.6 山梨酸标准储备溶液:准确称取。.1 0 0。g 山梨酸，加碳酸氢钠溶液(2 0 g/L)5 m L，加热溶解，移入1 0 0 m L 容量瓶中，加水定容至1 0 0 m L，山 梨酸含量为1 m g/m L，作为储备溶液。7.7 苯甲 酸、山梨酸标准混合使用溶液:取苯甲 酸、山梨酸标准储备溶液各1 0.0 m L，放入1 0 0 m L容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲 酸、山 梨酸各。.1 m g/m L.经滤膜(。4 5 u m)过滤(同时测定糖精钠时可加G B/T 5 0 0 9.2 8 中3.4 糖精钠标准储备溶液)。G B/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 68 仪器 高效液相色谱仪(带紫外检测器)。9 分析步骤9.1 样品处理9.1 门汽水:称取5.0 0-1 0.0 g 样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调p H约7。加水定容至1 0.2 0 m L，经滤膜(0.4 5 p m)过滤。9 门.2 果汁类:称取5.0 0 -1 0.。g 样品，用氨水(1+1)调p H约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜(0.4 5 p m)过滤。9.1.3 配制酒类:称取1 0.0 g 样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1 十1)调p H约 7，加水定容至适当 体积，经滤膜(0.4 5 p m)过滤。9.2 高效液相色谱参考条件9.2.1 色谱柱:Y WG-C,a 4.6 m m X 2 5 0 m m 1 0 p m不锈钢柱。9.2.2 流动相:甲 醇:乙酸铁溶液(0.0 2 m o l/L)(5:9 5).9.2.3 流速:1 m l./m i n,9.2.4 进样量:1 0 I L,9.2.5 检测器:紫外检测器，波长2 3 0 p m，灵敏度。.2 A U F S9.3式中根据保留时间定性，外标峰面积法定量。计算X,m,义 1 0 0 0mXV_于 井 X 1 00 0V,.(2):X,-样品中苯甲 酸或山梨酸的含量,g/k g;m,进样体积中苯甲 酸或山梨酸的质量,m g;V,进样体积，m L;V,样品稀释液总体积，m L;m,样品质量 8,结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。允许差:相对相差簇1 0 0 o 0 其他同G B/T 5 0 0 9.2 8 的5.6.注:本方法可同时测定糖精钠。第三篇薄层色谱法(第三法)1 0 原理样品酸化后，用乙醚提取苯甲 酸、山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚酞胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。试剂异丙醉正丁醇11111112G B/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 61 1.3 石油醚:沸程为3 0-6 0 C。1 1.4 乙醚:不含过氧化物1 1.5 氨水。1 1.6 无水乙醇。1 1.7 聚酞胺粉:2 0 0目。1 1.8 盐酸(1+1):取 1 0 0 m l盐酸，加水稀释至2 0 0 mL1 1.9 氯化钠酸性溶液(4 0 g/L):于氯化钠溶液(4 0 g/1)中加少量盐酸(1+1)酸化。1 1.1 0 展开剂。1 1.1 0.，正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2),1 1 门0.2 异丙醇+氨水+无水乙醉(7+1+2)01 1.1 1 山梨酸标准溶液:准确称取。.2 0 0 0 g 山 梨酸释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0 m g山梨酸。1 1.1 2 苯甲酸标准溶液:准确称取。.2 0 0 0 g 苯甲酸释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0 m g 苯甲酸。，用少量乙醇溶解后移入 1 0 0 m L容量瓶中，并稀用少量乙醇溶解后移入1 0 0 m L容量瓶中，并稀1 1.1 3 显色剂:澳甲 酚紫一 乙 醇(5 0%)溶液(0.4 g/L)，用氢氧化钠溶液(4 g/L)调至p H=8,1 2 仪器1 2.1 吹风机。1 2.2 层析缸。1 2.3 玻璃板:1 0 c m X 1 8 c m o1 2.4 微量注射器:1 0 p L,1 0 0 I L,1 2.5 喷雾器。1 3 操作方法1 3.1 样品提取 称取2.5 0 g 事先混合均匀的样品，置于2 5 m L带塞量筒中，加 0.5 m L盐酸(1 十1)酸化，用 1 5,1 0 m l 乙醚提取两次，每次振摇 1液。用3 ml.抓化钠酸性溶液(4 0m i n，将上层醚提取液吸入另一个 2 5 m L带塞量筒中，合并乙醚提取g/L)洗涤两次，静止 1 5 m i n，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入2 5 m L 容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀约4 0 的水浴上挥干，加入。.1 01 3.2 测宁。吸取 1 0.0 m L乙醚提取液分两次置于1 0 m L带塞离心管中，在mL乙醇溶解残渣，备用1 3.2.1 聚酞胺粉板的制备:称取 1.6 g 聚酞胺粉，加0.4 g 可溶性淀粉，加约7 m L水，研磨3-5 m i n,立即倒人涂布器内制成 1 0出。置于干燥器中保存。c m X1 8 c m,厚度。.3 m m的薄层板两块，室温干燥后，于8 0 干燥 1 h，取1 3-2.2 点样:在薄层板下端 2 c m的基线上，山梨酸、苯甲酸标准溶液。用微量注射器点1 川,2 川 样品液，同时各点1 越,2 k L1 3.2.3 展开与显色:将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂(1 1.1 0.1 或 1 1.槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至1 0 c m，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色1 0.2)的展开槽内，展开山梨酸1 3.3，背景为蓝色、苯甲 酸的量与标准斑点比 较定量(山 梨酸、苯甲 酸的比移值依次为。.8 2,0.7 3)0。样品中所含计算x.,m,X 1 0 0 0-一-.一一 1 0Vms入 万 声X,X 1 0 0 0 乙 J V (3)G B/T 5 0 0 9.2 9-1 9 9 6式中:X,样品中苯甲 酸或山梨酸的含量,g/k g;m,测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的质量,m g;V,加人乙醇的体积，m L;V 6 测定时点样的体积,mL;m s 祥品质量，9;1 0测定时吸取乙醚提取液的体积，m L;2 5 样品乙醚提取液总体积，m L o 注:本方法还可以同时测定果公、果汁中的塘精第四篇 禁用防腐剂定性试验(第四法)1 4 翻酸、确砂1 4.1 试剂1 4.1.1 盐酸(1+1):量取盐酸1 0 0 m L，加水稀释至2 0 0 m I。1 4-1.2 碳酸钠溶液(4 0 g/L),1 4-1.3 氢氧化钠溶液(4