GBT 5009.35-1996 食品中着色剂的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G s/r 5 0 0 9-3 5-1 9 9 6食品中合成着色剂的测定方法代替 G B 5 0 0 9.3 5-8 5Me t h o d f o r d e t e r m i n a t i o n o f s y n t h e t i c c o l o u r i n f o o d s，主题内容与适用范围 本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。本标准适用于食品中合成着色剂的测定。第一篇高效液相色谱法(第一法)2 原理 食品中人工合成着色剂用聚酞胺吸附法或液一 液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留 时间定性和与峰面积比 较进行定量。最小检出量，新红5 n g、柠檬黄4 n g,觅菜红6 n g、胭脂红8 n g、日 落黄7 n g,赤醉红1 8 n g,亮蓝2 6 n g，当进样量相当0.0 2 5 g 时最低检出 浓度分别为0.2 m g/k g;0.1 6 m g/k g;0.2 4 m g/k g;0.3 2 m g/k g;0.2 8 m g/k g;0.7 2 m g/k g;1.0 4 m g/k g,3 试剂3.13.23.33.43,53.63.73.8匀。3.93.1 03.1 13.1 23.1 33.1 43.1 53.1 6新红mL)正己烷。盐酸。乙酸。甲醇:经滤膜(0.5 Ji m)过滤.聚酞胺粉(尼龙6):过2 0 0目 筛。乙酸按溶液(0.0 2 m o l/L):称取1.5 4 g 乙酸按，加水至1 0 0 0 m L,溶解，经滤膜(0.4 5 W m)过滤。氨水:量取氨水2 m l,，加水至1 0 0 m L，混匀。氨水一 乙酸按溶液(0.0 2 m o l/L):量取氮水 0.5 m L，加乙酸钱溶液(0.0 2 m o l/L)至 1 0 0 0 m L,混甲 醉一 甲 酸(6+4)溶液:量取甲 醉6 0 m L,甲 酸4 0 m L,混匀。柠檬酸溶液:称取2 0 g 柠橄酸(C,H,O,.H,O)，加水至1 0 0 m L,溶解混匀。无水乙醇一 氨水一 水(7 十2 f1)溶液:量取无水乙醇7 0 m L,氨水2 0 m L、水1 0 m L,混匀.三正辛胺正丁醉溶液(5%):量取三正辛胺5 m L，加正丁醉至1 0 0 m L,混匀。饱和硫酸钠溶液.硫酸钠溶液(2 g/L),p H 6 的水:水加柠檬酸溶液调p H值到6,合成着色剂标准溶液:准确称取按其纯度折算为1 0 0%质量的柠檬黄、日 落黄、览菜红、胭脂红、赤鲜红、亮蓝、靛蓝各0.1 0 0 g,置1 0 0 m L容量瓶中，加p H 6 水到刻度。配成水溶液(1.0 0 m g/中华人民共和国卫生部1 9 9 6 一 0 6 一 1 9 批准1 9 9 6 一 0 9 一 0 1 实施G s/r 5 0 0 9.3 5-1 9 9 63.1 7 合成着色剂标准使用液:临用时上述溶液(或将3.1 6)加水稀释2 0 倍，经滤膜(0.4 5 p m)过滤。配成每毫升相当5 0.0 p g 的合成着色剂。4 仪器 高效液相色谱仪，带紫外检测器，2 5 4 n m波长。5 分析步骤5 门样品处理5 门.，桔子汁、果味水、果子露汽水等:称取2 0.0 -4 0.0 g，放入1 0 0 m L烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。5.1.2 配制酒类:称取2 0.0 -4 0.0 g，放1 0 0、m L 烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。5.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等:称取5.0 0-1 0.0 0 g，粉碎样品，放入1 0 0 m L小烧杯中，加水3 0 m L,温热溶解，若样品溶液p H值较高，用柠檬酸溶掖调p H值到6 左右。5.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品:称取5.0 0 -1 0.O O g，放入 1 0 0 m L小烧杯中，用水反复洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。:.:.，色素提取成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G 3 垂融漏斗抽滤，用加热至6 0 0C，将1 9 聚酞胺粉加少许水调6 0 0C p H=4 的水洗涤 3-5 次，然后用甲醇聚酞胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调p H值到 6,一 甲 酸混合溶液洗涤3 -5 次(含赤醉红的样品 用5.2.2 法处理)，再用水洗至中性，用乙醇一 氨水一 水混合溶 液 解吸3 -5 次，每 次5 m L，收 集 解 吸 液，加 乙 醉 中 和，蒸 发 至 近干，加 水 溶 解，定 容 至5 m L。经 滤膜(0.4 5 p m)过滤，取1 0 p L 进高效液相色谱仪。5.2.2 液一 液分配法(适用于含赤醉红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2 m L盐酸、三正辛胺正丁醉溶液(5%)1 0 2 0 m L，振摇提取，分取有机相，重复提取，至到有机相无色，合并有机相，用 饱 和 硫 酸 钠 溶 液 洗2 次，每 次1 0 m L，分 取 有 机 相，放 蒸 发 皿 中，水 洛 加 热 浓 缩 至1 0 m L，转 移 至 分液 漏 斗 中，加6 0 m L 正己 烷，混 匀，加 氮 水 提 取Z -3 次，每 次5 m L，合 并 氨 水 溶 液 层(含 水 溶 性 酸 性 色，用正己烷洗 2 次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至 5 m L;经滤膜4 5 p m)过滤，取1 0 p L 进高效液相色 谱仪。高效液相色谱参考条件、，夕.勺口素(05.5.3.1 柱:Y WG-C 1 8 1 0 p m不锈钢柱4.6 m m(i d)X 2 5 0 m m,5.3.2 流动相:甲醇-0.0 2 m o l/L乙酸钱溶液(p H=4)。5.3.3 梯度洗脱:甲醇:2 0 Yo-3 5%,3%/m i n;3 5%-9 8%,9%/m i n;9 8%继续6 m i n e5.3.4 流速:1 m L/m i n e5.3.5 紫外检测器，2 5 4 n m波长。5.4 测定 取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。55 计算 X,式中:X,样品中着色剂的含量A,X 1 0 0 0 m,X V z/V,X 1 0 0 0 X 1 0 0 0,B/k g;.(1)m,样液中着色剂的质量,p 8;V,进样体积，m L;V,样品稀释总体积，m L;G s/T 5 0 0 9.3 5-1 9 9 6 m 2 样品质量+g.结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。允许差相对相差1 0%.其他户011 :rlJ反 八种着色剂色谱分离图1 一新红f 2-柠橄黄;3-宽菜红;4 一旋蓝;5 一胭脂红，6 一日 落黄，7 一亮蓝;8-赤醉红 第二篇 薄层色谱法(第二法)6 原理 水 溶 性酸 性合 成 着 色 M 在 酸 性条件 下 被 聚 酶 a吸 附，而 在 碱 性 条 件下 解 吸 附，再用 纸 色 谱 法 或 薄 层色谱法进行 分离后，与标准比 较定 性、定量 最低检出 量为5 0 p g.点 样量 为1 g，样品最 低检出 浓度约为5 0 m g/k g.7 试剂7，石油醚:沸程6 0-9 0 C。了.2 甲醇。7.3 聚酞胺粉(尼 龙6):2 0 0 目，7.4 硅胶G.7.5 硫酸:(1-1 0).7.6 甲醉一 甲酸溶液:(6+4).7.7 氢 氧化 钠溶 液(5 0;g r,L).7.8 海沙:先用盐酸(1 十1 0)煮沸1 5 m i n，用水洗至中 性，再用氢氧化钠溶液(5 0 g/L)煮沸1 5 m i n，用水洗至中 性，再于1 0 5 干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。7.9乙醇(5 0%).乙醇一 氨溶液:取1 m L氨水，加乙 醉(7 0)至1 0 0 m L.p H 6 的水:用柠檬酸溶液(2 0%)调节至p H 6.盐酸(1+1 0).柠檬酸溶液(2 0 0 g/L)。钨酸钠溶液(1 0 0 g/L)。卜日份月.六J口d月日月胜胜月.月.，IJI .，了，了7口，了一广.G s/T 5 0 0 9.3 5-1 9 9 67.1 5 碎瓷片:处理方法同7.8.7.1 6 展开剂7.1 6.1 正丁醇一 无水乙醇一 氨水(1 0 0)(6+2+3):供纸色谱用7.1 6.2 正丁醇一 毗吮一 氨水(1 0 a)(6+3+4):供纸色谱用。7.1 6.3 甲乙酮一 丙酮一 水(7+3+3):供纸色谱用。7.1 6.4 甲醇一 乙二胺一 氨水(1 0+3+2):供薄层色谱用。7.1 6.5 甲醇一 氨水一 乙醇(5+1+1 0):供薄层色谱用。7.1 6.6 柠檬酸钠溶液(2 5 g/L)一 氨水一 乙 醇(8+1+2):供薄层色谱用。7.1 7 合成着色剂标准溶液:按3.1 6 方法，分别配制着色剂的标准溶液浓度为每毫升相当于1.0 m g7.1 8 着色剂标准使用液:临用时吸取色素标准溶液各5.0 m L，分别置于5 0 m L容量瓶中，加p H 6 的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于。.1 0 m g 着色剂。8 仪器8.1 可见分光光度计。8.2 微量注射器或血色素吸管。8.3 展开槽,2 5 c mX 6 c mX 4 c m.8.4 层析缸。8.5 滤纸:中速滤纸，纸色谱用。8.6 薄层板:5 c m X 2 0 c m,87 电吹风机。8.8 水泵。9 分析步骇9.19.1.19.1.29.1.3样品处理 果味水、果子露、汽水:称取5 0.0 g 样品于1 0 0 m L 烧杯中。汽水需加热驱除二氧化碳。配制酒:称取1 0 0.0 g 样品于 1 0 0 m L烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。硬糖、蜜饯类、淀粉软糖:称取5.0 0 或1 0.0 g 粉碎的样品，加3 0 m L水，温热溶解，若样液p H值较高，用柠檬酸溶液(2 0 0 g/L)调至p H 4 左右。9.1.4.1 奶糖:称取1 0.0 g 粉碎均匀的样品，加3 0 m L乙醇一 氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约 2 0 m L,立即用硫酸溶液(1 十1 0)调至微酸性再加1.0 m L 硫酸(1+1 0)，加1 m L钨酸钠溶液(1 0 0 g/L)，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。9.1.4:2 蛋糕类:称取1 0,0 g 粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干用品(用手摸已 干燥即可以)，加入3 0 m L石油醚搅拌。放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，全部倒入G 3 垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇一 氨溶液提取色素，直至着色剂全部提完，以下按9.1.4.1自“置水浴上浓缩至约2 0 m L”起依法操作。9.2 吸附分离 将处理后所得的溶液加热至7 0 C，加入。.5-1.0 g 聚酞胺粉充 分搅拌，用柠檬酸溶液(2 0 0 g/L)调p H至4，使着色剂完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酞胺粉。将吸附着色剂的聚酞胺全部转入G 3 垂融漏斗中过滤(如用G 3 垂融漏斗过滤可以用水泵慢慢地抽滤)。用p H 4 的7 0 水反复洗涤，每次2 0 m L，边洗边搅拌。若含有天然着色剂，再用甲醇一 甲酸溶液洗涤 1-3 次，每次 2 0 m L，至洗液无色为止。再用7 0 水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇一 氨溶液分次解吸全部着色剂，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至5 0 m L,用分光光度法进行测定。如果为多种着色剂混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即将上述落液置水G B/T 5 0 0 9.3 5-1 9 9 6浴上浓缩至2 m L后移入5 m L容量瓶中，用乙 醇(5 0%)洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。9.3 定性931 纸色谱 取色谱用纸，在距底边2 c m的起始线上分别点3 -1 0 P L样品溶液、1-2 u L 着色剂标准溶液