GBT 17377-1998 动植物油脂 脂肪酸甲酯的气相色谱分析.pdf

G B/T 1 7 3 7 7-1 9 9 8前言 本标准是依据我国动植物油脂检侧技术的实际与发展状况，等效采用国际标准I S O 5 5 0 8:1 9 9 0 动植物油脂 脂肪酸甲醋的气相色谱分析 制定的.在标准的编写与表述上按照G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则第1 单元:标准的起草与表述规则第1 部分:标准编写的基本规定 和G B 1.4-8 8 标准化工作导则化学分析方法标准编写规定 的要求进行编写的。依据I S O 5 5 0 8,1 9 9 0 编写本标准时，将“理论塔板数和分离度的测定”部分作为标准的附录放入附录 A中。本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。本标准由中华人民共和国国内贸易部归口。本标准起草单位:国内贸易部谷物油脂化学研究所。本标准主要起草人:李歌、应珊红、郝希成。GB/T 1 7 3 7 7-1 9 9 8I S O前言 I S O(国际标准化组织)是由各国标准化团体(I S O成员团体)组成的世界性联合会。制定国际标准的工作通常由I S O技术委员会进行，各成员团体若对某技术委员会已确立的标准项目 感兴趣，均有权参加该委员会的工作。与I S O保持联系的各国际组织(官方的或非官方的)也可参加有关工作。在电 工技术标准化方面，I S()与国际电 工委员会(I E C)保持密切合作关系。由 技术委员会正式通过的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准需取得至少7 5%参加表决的成员团体的同意才能正式通过。I S O 5 5 0 8 x 1 9 9 0 是由I S O/T C 3 4 农产食品技术委员会制定的。经过技术修订构成的第二版取消并代替第一版(I S O 5 5 0 8:1 9 7 8),中华 人 民 共 和 国 国家 标 准 动植物油脂脂肪酸甲醋的气相色谱分析 G B/T 1 7 3 7 7-1 9 9 8e q v I S O 5 5 0 8:1 9 9 0 A n i m a l a n d v e g e t a b l e f a t s a n d o i l s-A n a l y s i s b y g a s c h r o m a t o g r a p h y o f m e t h y l e s t e r s o f f a t t y a c i d s，范围 本标准给出了采用填充柱或毛细管柱气相色谱法定性、定量测定依据G B/T 1 7 3 7 6 规定的方法获得的脂肪酸甲醋混合物组成的一般性指南。本标准不适用于聚合的脂肪酸。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 1 7 3 7 6-1 9 9 8 动植物油脂脂肪酸甲 醋制备(e q v I S O 5 5 0 9:1 9 7 8)3 试荆3.1 载气:惰性气体(氮、氮、氛、氢等)，干燥且氧气含量低于1 0 m g/k g,注:只有在采用毛细管柱进行分析时，作为载气的氢气能使分析速度加快一倍，但有危险。应配用安全装置.3.2 助嫩气3.2.1 氢气(纯度9 9.9%)，不含有机杂质。3.2.2 空气或氧气，不含有机杂质。3.3 参比标准 纯脂肪酸甲醋的混合物或已 知油脂组成的甲 醋，其组成最好与欲分析之脂肪物质相似。应注意防止多不饱和脂肪酸氧化。4 仪器 本标准涉及到气相色谱法常用的设备，使用填充柱或毛细管柱及火焰离子化检测器。任何符合附录A中规定的效率和分离度的设备均适用。4.1 气相色谱仪 气相色谱仪由以下单元组成。4.1.1 进样装置 可任选一种进样装置:a)配用填充柱，尽可能有最小的死体积(在这种情况下进样口 应可被加热至比 柱温高2 0-5 0 的温度)。b)配用毛细管柱，在此种情况下，进样装置应特殊设计以便适用于此种柱管。可使用分流式进样装国家质f技术监.局1 9 9 8 一 0 5 一 0 8 批准1 9 9 8 一 1 2 一 0 1 实施G B/T 1 7 3 7 7-1 9 9 8置也可使用非分流式进样装置。注:在不含碳原子数少于 1 6 的脂肪酸时，可以使用移动针式进样器。4.1.2 柱箱 柱箱应能将色谱柱的温度加热至 2 6 0 以上，并能维持所需温度(填充往为士1 0C，毛细管柱为士。.1 0C)。当使用熔融石英管时，后一条件是特别重要的.建议在所有情况下，特别是在分析碳原子数少于1 6 的脂肪酸时，采用程序升 温。4.1.3 填充柱4.1.3.1 管柱:应由对被分析的物质惰性的材料制成(例如玻瑞或不锈钢)，具有如下尺寸:a)长度:1 -3 m。当长链脂肪酸(碳原子数多于2 0)存在时，应使用较短的柱子;当测定四或六碳的脂肪酸时，建议使用长度为2 m的管柱。b)内径:2 -4 m m,注 工 如果带有三个以上双健的多不饱和组分存在时，它们会在不锈切管柱内分解.2 可以使用双柱系统.4.1.3.2 填充物由以下要素构成:a)载体:酸洗并硅烷化的硅藻土或其他适用的惰性载体，且粒度分布范围狭窄(粒度为1 2 5-2 0 0 p m 时为2 5 p m)，平 均粒度与 管柱内 径和长 度有关。b)固定相:聚醋型极性固定液(如二甘醉聚丁二酸醋D E G S、丁二醉聚丁二酸醋B D S、乙二醉聚己二酸醋等E G A),氛基硅酮或其他符合色谱分离要求的允许使用的溶剂。固定相用量为填充物的5%-2 0 0 o(m/m)。非极性固 定相可用于某些分离。4.1.3.3 柱的老化:如果可能，将柱子与检测器脱开，以2 0 6 0 m L/m i n 的流速将惰性气体通人新制备的色谱柱，将柱箱逐渐加热至1 8 5 C，在此温度下至少保持 1 6 h 后，再于 1 9 5 的温度下继续通气2 h,4.1.4 毛细管柱4.1.4 门管柱:应由对被分析的物质惰性的材料制成(通常使用玻璃或熔融石英管)。内径为0.2 0.8 m m。在涂布固定相前，需对内表面进行适当处理(如表面制备、钝化)。在多数情况下，2 5 m长已足够。4.1.4.2 固定相:通常使用聚乙二醇类(聚乙二醉-2 0 0 0),聚醋(丁二醉聚丁二酸酷)或极性的聚硅氧烷(氰基硅氧烷)。键合(交联的)柱也是适用的。注:使用极性聚乙 烯硅氧烷柱分离鉴定亚麻破和2。碳酸会有一定困难.涂层要薄，在。.1-0.2 f e m之间。4.1.4.3 柱的安装、老化:遵从安装毛细管柱的常用注意事项，如色谱柱在柱箱内的位置(支架)，选择并安装接头(气密度)，柱子末端在进样器和检测器中的位置(减少死体积)。柱内通入载气流仁 例如对于长2 5 m内径0.3 m m的柱为3 0 k P a(0.3 b a r),令柱箱以3 C/m i n 的速度程序升温，从环境温度升温至比固定相分解温度极限低1 0 的温度，对柱子进行老化。保持此柱箱温度1 h 至基线稳定。降至1 8 0 在恒温状态下进行工作。注:可助用已预先老化的色谱柱.4.1.5 检测器 以可加热到高于柱温的检测器为宜。4.2 注射器 注射器最大容量应为1 0 p L，刻度应为0.1 p L.4.3 记录器c s/T 1 7 3 7 7-1 9 9 8 如果由 记录曲线计算被分析混合物的组分，则需要一台高精度、能与所用仪器相匹配的电子记录器。记录器应具有如下性能:a)响应速率小于 1.5 s，最好小于 1:(响应速率是当瞬间物入 1 0 0%信号时.记录笔从。%移动至9 0%所需的时间)。b)记录纸宽:至少2 5 c m,c)记录纸速:在0.4-2.5 c m/m i n 之间可调。4.4 积分仪或计算器(任选)可用电子积分仪或电子计算器进行快速、准确的计算。它应有灵敬度足够的线性响应，对荃线偏移也应能作出令人满愈的校正。5 操作步驻 5.1-5.3 叙述的 操作 步骤与 使用火 焰离子化 检测器有关.作为替代，亦可使用热导检侧器(根据热传导变化的工作原理)进行气相色谱分析。但要按第7 章中所述修改操作条件。5.1 试验条件:选择最佳操作条件。5.1.1 填充性 在选择试验条件时，应考虑下列各因素;a)柱的长度和直径，b)固定相的性质和数量;c)柱温;d)载气流速，e)所需的分离度;f)试验用量，选择检测器和静电计结合可给出线性响应的进样量;9)分析时间:通常，按表1 和表2 中给出的数值将得出预期的结果，即对于硬脂酸甲 醋理论塔板数不少于2 0 0 0/(米柱长)，并可在 1 5 m i n内洗脱。表 1，柱 内 径,m m救 气 流 l,m L/m in1 5 -2 52 0-4 04 0-6 0表 2固定相浓度(，/。).%柱温，1 7 51 8 01 8 51 8 551015加 如仪器性能允许，进样口 温度应为约2 0 0 C，而检侧器温度应等于或高于柱温。作为一条规律，供给火焰离子化检测器的氢气流量与载气流量的比 值应为1*2-1,1，这取决于管柱的直径。氧气(助燃气)的流量则5 -1 0 倍于氢气的流量，5.1.2 毛细管柱 毛细管柱的效率和渗透性意味着各组分之间的分离和分析时间主要依赖于柱内的载气流速。因此必须根据操作者希望改善分离还是进行快速分析，按照此参数(或者更简单地根据色谱柱的压力损失)G B/r 1 7 3 7 7-1 9 9 8使操作条件达到最佳状态。5.2 进祥量 用注射器 4.2)取。.1-2 p L 按照G B/T 1 7 3 7 6 制备的甲 醋溶液进样。在溶液不含醋的情况下，可配制一种在色谱纯庚烷中约为1 0 0 m g/m L的溶液，取此榕液。，1,.1 p L 进样。如果检测痕量组分，试样量可以增大(至1 0 倍)。5.3 分析 通常，按5.1 条规定的 条件操作。不过，在测定碳原子数少于1 2 的脂肪酸时可能需要降低柱温，而测定多于2 0 碳的脂肪酸时可能需要升高柱温，有时在上述两种情况下，也可能采用 程序升沮。例如，若试样中含有低于1 2 碳的脂肪酸甲醋，可在1 0 0 下进样(如有丁酸存在，则可在5 0 -6 0 进祥)并立即以4-8 C/m i n 的速率升至最佳温度。在某些情况下可以将这两个步骤结合起来。程序升温后，在恒定温度下继续洗脱直至所有组分洗脱出来。如果仪器无程序升温，可在1 0 0 和1 9 5 两个固 定温度下 进行 操作。如有必要，例如在分析鱼油样品或同时存在着成对的C 1 8 3 和c 2 o:0 或C 1 8:3 和C 1 8:2 的试样时，建议使用两种极性不同的固定相进行分析，以确认无被掩蔽的蜂。5.4 标准色谱图和标准曲线的制备 用与试样相同的条件分析参比 标准混合物(3.3)，并测出各脂肪酸成分的保留时间或保留距离。在半对数坐标纸上以任意不饱和度作图，所得的曲 线将显示保留时间或保留距离的对数是碳原子数的函数。在等温条件下，相同不饱和度的直链脂肪酸的曲 线应是直线。这些直线大致上是平行的。必须防止存在“隐蔽峰.，即在该处的分离度不足以分离两种组分。6 结果农示6.1 定性分析 由 按54 条绘制的曲线图上确定样品的甲 酷峰，必要时可利用擂入法.6.2 定量分析6.2.1 组成的测定 除意外情况外，通常使用内 部归一化法，即假定试样的所有组分都显示在色谱图上，因此各峰面积的总和即代表1 0 0%的组成(完全洗脱)。如果仪器配有积分仪，可使用由此获得的数据。如无积分仪，则可用峰高乘半蜂宽测定各峰的面积，此时应将记录过程所使用的衰减考虑在内。6.2.2 计算方法6.2.2，一般情况:通过测定相应峰面积对所有峰面积总和的百分数来计算给定组分i 的含量，用甲酷的质量百分比表示，公式如下:A;x 1 0 0 乏今(1)式中:儿组分i 的峰面积，E A 各峰面积的总和。计算结果保留至小数点后一位。注:一般 情况下，由 峰面积比 计算的 结果可被认为代表质最百分比。对于这个假设不成立的 情况，请参阅第6.2.2.2 条.6.2.2.2 校正因子的使用:G B/T 1 7 3 7