GBT 18397-2014 预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法.pdf

1Cs65.120B46中华人民共和国国家标准GB/T18397一2014代替GB/T18397一2001预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法Determination of pantothenic acid in premix-High performance liquid chromatography2014-07-08发布2015-01-10实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T18397-2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替GB/T18397一2001复合预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法。本标准与GB/T18397-2001相比主要变化如下：一标准名称由复合预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法改为预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法；范围中删除了“也适用于浓缩饲料中泛酸的测定”，将“测量范围为每千克样品中含泛酸在50mg以上”修改为“本标准测定泛酸的检出限为5mg/kg,定量限为20mg/kg”；样品提取剂不加EDTA,直接采用流动相进行提取；流动相用乙腈与0.05%磷酸溶液的混合液代替磷酸缓冲液；结果计算中，用外标法多点校正或单点校正代替原来的“单点校正”。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、通威股份有限公司。本标准主要起草人：符金华、杨发树、文虹、饶辉、刘耀敏、张凤枰、樊晶、赵艳。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T18397-2001.GB/T18397-20145.4超声波清洗器。5.5样品筛：孔径0.28mm。5.6高效液相色谱仪，配有紫外检测器（或二极管矩阵检测器）。6试样的制备按GB/T14699.1规定，取有代表性饲料样品至少500g,四分法缩减至少100g,磨碎，过0.28mm孔径样品筛，混匀装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤7.1提取称取维生素预混合饲料0.25g0.5g,复合预混合饲料1g2g,精确至0.0001g,置于150mL具塞锥形瓶中。准确加入50mL流动相，于超声波水浴提取15min,或置于摇床上振摇提取20min,静置。取适量溶液3000r/min离心5min,离心后上清液经过0.45m滤膜过滤，滤液供高效液相色谱仪分析用。7.2测定7.2.1液相色谱参考条件色谱柱：C1柱，柱长150mm,内径4.6mm,粒度54m,或具有相同性能的色谱柱；流动相：将50mL的乙腈加人到950mL膦酸溶液(4.3)中混匀；流速：l.0mL/min;进样量：10L:柱温：30；检测器：紫外检测器（或二极管矩阵检测器PDA)使用波长200nm。7.22液相色谱测定分别取适量的标准工作液(4.4.2)和试样溶液(7.1)，按7.2.1列出的条件进行液相色谱分析测定。按照保留时间进行定性，以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积定量。待测样液中泛酸的响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。泛酸色谱图参见附录A。8结果计算与表示8.1结果计算试样中泛酸的含量(X),以质量分数表示，按式(1)计算。X=XVXn*(】)m式中：X一试样中泛酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);一试样溶液中泛酸的质量浓度，单位为微克每毫升(4g/mL);提取时加人的流动相总体积，单位为毫升(L);-试样质量，单位为克(g)；2