GBT 14926.19-2001 实验动物 汉坦病毒检测方法.pdf

I Cs 6 5.0 2 0.3 0B 4 4署8中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 4 9 2 61 8-1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1G B/T 1 4 9 2 6.5 6-1 4 9 2 6.6 4-2 0 0 1实验动物微生物学检测方法(4 L a b o r a t o r y a n i m a l-Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n me t h o d s2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施中华人民共和匡国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 婿食品伙伴网http:/ 1 4 9 2 61 8-1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1G B/T 1 4 9 2 6-5 6-1 4 9 2 6-6 4-2 0 0 1目录G B/T 1 4 9 2 6.1 8-2 0 0 1 实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法.1G B/T 1 4 9 2 6.1 9-2 0 0 1 实验动物汉坦病毒检测方法.4G B/T 1 4 9 2 6.2 0-2 0 0 1 实验动物鼠痘病毒检测方法 7G B/T 1 4 9 2 6.2 1 -2 0 0 1 实验动物兔出血症病毒检测方法 .1 0G B/T 1 4 9 2 6.2 2-2 0 0 1 实验动物小鼠肝炎病毒检测方法 .1 3G B/T 1 4 9 2 6.2 3-2 0 0 1 实验动物仙台病毒检测方法 .1 6GB/T 1 4 9 2 6.2 4-2 0 0 1实验动物小 鼠肺炎病 毒检测方法.1 9G B/T 1 4 9 2 6.2 5-2 0 0 1 实验动物呼肠孤病毒 m型检测方法 .2 2G B/T 1 4 9 2 6.2 6-2 0 0 1 实验动物小鼠脑脊髓炎病毒检测方法 .2 5G B/T 1 4 9 2 6.2 7-2 0 0 1 实验动物小鼠腺病毒检测方法 .2 8G B/T 1 4 9 2 6.2 8-2 0 0 1 实验动物小鼠细小病毒检测方法 .3 1G B/T 1 4 9 2 6.2 9-2 0 0 1 实验动物多瘤病毒检测方法 .3 4GB/T 1 4 9 2 6.3 0-2 0 0 1 实验动物兔轮状病毒检测方法 .3 7GB/T 1 4 9 2 6.3 1-2 0 0 1 实验动物大鼠细小病毒(K R V和H-1 株)检测方法.4 0GB/T 1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1 实验动物大鼠冠状病毒/延泪腺炎病毒检测方法.4 3GB/T 1 4 9 2 6.5 6-2 0 0 1 实验动物狂犬病病毒检测方法 .4 6GB/T 1 4 9 2 6.5 7-2 0 0 1 实验动物犬细小病毒检测方法 .4 9GB/T 1 4 9 2 6.5 8-2 0 0 1 实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法 .5 2GB/T 1 4 9 2 6.5 9-2 0 0 1 实验动物犬瘟热病毒检测方法 .5 5GB/T 1 4 9 2 6.6 0-2 0 0 1 实验动物琳猴疙疹病毒 1 型(B病毒)检测方法 5 8GB/T 1 4 9 2 6.6 1-2 0 0 1 实验动物猴逆转D型病毒检测方法 6 1GB/T 1 4 9 2 6.6 2-2 0 0 1 实验动物猴免疫缺陷病毒检测方法 .6 4G B/T 1 4 9 2 6.6 3-2 0 0 1 实验动物猴T淋巴细胞趋向性病毒 I 型检测方法.6 7GB/T 1 4 9 2 6.6 4-2 0 0 1实验动物猴痘病毒检测方法.7 0食品伙伴网http:/ 1 4 9 2 61 9-2 0 0 1前言 本标准是对G B/T 1 4 9 2 6.1 9-1 9 9 4 实验动物流行性出血热病毒检测方法 的修订。将“实验动物流行性出血热病毒检测方法”改称为“实验动物汉坦病毒检测方法”。删除了GB/T 1 4 9 2 6-1 9-1 9 9 4中“5 检测方法和结果判定”的内容，增加了检测病毒抗体的酶联免疫吸附试验和免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:贺争鸣。本标准于 1 9 9 4年 1月首次发布。食品伙伴网http:/ 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准实验动物汉坦病毒检测方法GB/T 1 4 9 2 6.1 9-2 0 0 1代替 G B/T 1 4 9 2 6.1 9-1 9 9 4La b o r a t o r y a n i ma l-Me t h o d f o r e x a mi n a t i o n o f Ha n t a v i r u s旧 V)范 围本标准规定了汉坦病毒(H V)的检测方法、试剂等。本标准适用于小鼠、大鼠 H V的检测。引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 1 4 9 2 6.5 0-2 0 0 1 实验动物 酶联免疫吸附 试验 G B/T 1 4 9 2 6.5 2-2 0 0 1 实验动物 免疫荧光试验原理根据免疫学原理，采用HV抗原检测小鼠、大鼠血清中HV抗体。主要试剂和器材4.1试剂4.1.1 E I A S A抗原4.1.11 特异性抗原 在生物安全柜内，用 H a n t a a n型或 S e o u l 型毒株感染的E 6细胞，当特异性荧光达+时，即可收获培养物。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成E L I S A抗原。4.1.1.2正常抗原 E 6 细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。4.1.2 抗原片 在生物安全柜内，用 H a n t a a n型或 S e o u l 型毒株感染 E 6细胞，每 2 -3 d更换维持液，培养 7-1 0d，用I F A法测定细胞内特异性荧光。当荧光达+时，将细胞用胰酶分散，用 P B S洗涤，涂片。室温干燥的同时，在紫外线下 2 0 c m处照射 3 0 mi n,冷丙酮固定 1 0 mi n,-2 0 C保存。4 门.3 阳性血清 用件丙内脂灭活HV抗原，免疫清洁或 S P F小鼠或大鼠所获得的抗血清。4.1.4 阴性血清中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 1 一 0 8-2 9批准2 0 0 2-0 5-0 1实施食品伙伴网http:/ B/T 1 4 9 2 61 9-2 0 0 1 清洁或 S P F小鼠或大鼠血清。4.1.5 酶结合物 辣根过氧化物酶标记羊或兔抗小鼠、大鼠I g G抗体。用于检测 相应动物血清抗体;辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(S P A)，用于检测小鼠血清抗体。4.1.6 异硫佩酸荧光素标记羊或兔抗小鼠、大鼠I g G抗体，用于检测相应动物 血清 抗体。4.2器材4.2.1 酶标仪。4.2.2 荧光显微镜。4.2.3 3 7 培养箱或水浴箱。检 测方法5.1 采用E L I S A方法(见 G B/T 1 4 9 2 6.5 0-2 0 0 1)进行血清学检测。5.2 采用I F A方法(见G B/T 1 4 9 2 6.5 2-2 0 0 1)进行血清学检测。6 结 果判定对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性。结果报告根据判定结果，作出报告。食品伙伴网http:/