GB 4868-1996 职业性铍病诊断标准及处理原则.pdf

GB4868-1996附录A以皱为抗原的白细胞移动抑制试验（直接毛细管法）(补充件)A1材料与方法取静脉血1.52mL(加肝素50u/mL),轻轻搓动试管使之混合，放37水浴中1h。待红细胞自然沉降，吸取上层富于白细胞（包括淋巴细胞）的血浆。1500r/min离心10min后，去上清液留底层细胞。加Hank液洗涤细胞二次，每次洗后以1500r/min离心10min。去上清液，然后加含15%小牛血清RPM1640培养液0.5mL,混匀悬液后用8根长78cm,内径0.7士0.002mm的玻璃毛细管插入悬液（不要将毛细管内装入气泡），使毛细管吸入悬液约45cm高度左右。在酒精灯火焰封闭一端（空端)。然后将已封闭端朝试管底部，以1500r/min离心20min,取出毛细管，可见沉淀的红细胞与上清液之间有1mm的白细胞层。在距白细胞层1mm处用砂轮截断毛细管，并粘上消毒的凡士林，把毛细管粘在平皿底部。试验皿与对照皿各放4根毛细管（按细胞移动范围适当调开毛细管间距）。试验皿内加满1640培养液配成10g/mL硫酸铍(BeS0,)溶液，盖好盖子。对照皿加满1640培养液，同样盖好盖子，切勿留空气泡。水平放入37湿盒内培养21h,将培养皿放显微阅读器上，均放大10倍投影到阅读器毛玻璃上，用密度均匀的纸画下移动范围，将画出的面积剪下，在分析天平上称重，并计算出平均重量。A2计算公式及正常值移动指数(MI)计算公式：MI=实验皿样品平均重量(24根毛细管)*t*4*(A1)对照皿样品平均重量(24根毛细管)移动指数大于0.8为阴性，小于0.8为阳性。附录B皱激活活性玫瑰花结试验(补充件)B1材料与方法B1.1按常规活性玫瑰花试验方法分离淋巴细胞，制备绵羊红细胞(SRBC)和SRBC吸收的小牛血清。B1.2静脉取血5mL(加肝素24u/mL)。B1.3步骤：10mm100mm试管4支，其中2支为对照试管(C1、Cz),另2支为试验管(E1、E2),每管加淋巴细胞悬液0.1mL(含20万个淋巴细胞)。试验管加入0.15mL硫酸铍（生理盐水配制硫酸傲100g/mL),然后加含10%小牛血清RPMI1640培养液(pH7.27.4)至1mL:对照组管中同等体积生理盐水，37孵化2h(每0.5h摇匀一次)。终止孵化以1000r/min离心10min,离去上清液，摇匀，各管加入0.05mL经SRBC吸收过的小牛血清，混匀在37水浴中放置5min,室温5min后，加0.5 mL SRBC悬液（淋巴细胞：SRBC为1：6），混匀，立即以1000r/min离心5min,轻摇1020次，使沉淀的细胞在1min内重新悬浮。加入0.05%煌焦油蓝一滴，将细胞悬液充入自制的玫瑰花计数池(0.15cm3)内，计数2000个以上淋巴细胞，以每个淋巴细胞紧贴3个或3个以上SRBC者为玫瑰花结细胞(RFC)。