12391—1990中华人民共和国国家标准食物中核黄素的测定方法MethodfordeterminationofriboflavininfoodsGB/T12391—19901主题内容与适用范围本标准规定了用微生物法和荧光法测定食物中核黄素含量。本标准适用于各类食物中核黄的测定。第一篇微生物法2原理某一种微生物的生长（繁殖）必需某些维生素。例如干酪乳酸杆菌（Lactobacilluscasei，简称L.C.）的生长需要核黄素；培养基中若缺乏这种维生素该细菌；便不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况。以及它的代谢物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比，因此可以用酸度及混浊度的测定法来测定样品中核黄素的含量。3试剂本实验用水均需蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。3．1冰乙酸。3．2甲苯。3．3无水乙酸钠。3．4乙酸铅。3．5氢氧化铵。3．6干酪乳酸杆菌（LactobacilluscaseiATCC7489）。3．7盐酸：0.1mol/L。3．8氢氧化钠：1mol/L和0.1mol/L。3．90.9%氯化钠溶液（生理盐水）：使用前应进行灭菌处理。3．10核黄素标准储备液（25ug/mL）：将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。经过24h后。准确称取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5L水。将容量瓶置于温水中摇动，待其溶解，冷至室温，稀释至2L，移至棕色瓶内，加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中保存。3．11核黄素标准中间液（10ug/mL）,准确吸取20mL核黄素标准储备液，加水稀释至50mL。3．12核黄素标准中间液（0.1ug/mL），准确吸取1.0mL中间液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。每次分析要配制新标准使用液。3．13碱处理蛋白胨：分别称取40g蛋白胨和20g氢氧化钠于250mL水中。混合后，放于37±0.5℃恒温箱内，24～48h后取出，用冰乙酸调节pH至6.8，加14g无水乙酸钠（或23.28含有3分子结晶水的乙酸钠），稀释至800mL，加少许甲苯盛于溶液表面，于冰箱中保存。3．140.1%胱氨酸溶液：称取1gL—胱氨酸于小烧杯中。加20mL水，缓慢加入经约5～10mL盐酸，直至其完全溶解，加水稀释至1L，加少许甲苯盖于溶中华人民共和国卫生部1990—03—19批准1990—12—01实施中华人民共和国卫生部1990—03—19批准1990—12—01实施12391—1990液表面。3．15酵母补充液：称取100g酵母提取物干粉于500mL水中、称取150g乙酸铅于500mL水中。将两溶液混合，以氢氧化铵调节pH至酚酞量红色（取少许溶液检验）。离心或用布氏漏斗过滤，滤液用冰乙酸调节pH至5.5。通入硫化氢直至不生沉淀。过滤，通空气于滤液中，以排除多余的硫化氢。加少...
