GBT 13883-1992 饲料中硒的测定方法 2,3-二氨基萘荧光法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中硒的测定方法2,3 一 二氨基蔡荧光法G B/T 1 3 8 8 3 一 9 2M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o fs e l e n i u m i n f e e d s t u f f s-(DAN)f l u o r o me t r t主肠内容与适用范围 本标准规定了用 2,3 一 二氨基蔡(D A N)荧光法测定饲料中硒的方法。本标准适用于配合饲料、预混合料、浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。在萃取液中检测范围为。.0 0 1-0.1 p g/m L(以S e 计)。2 引用标准GB 1.4GB 6 6 8 2标准化工作导则化学分析方法标准编写规定实验室用水规格3 方法原理 先将试样中有机物破坏，使硒游离出来，在微酸性溶液中硒(I v)和2,3 一 二氨基蔡(D A N)生成4,5-苯基苯并硒二哇，用环己 烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取，用荧光光度计测定其荧光强度。4 试剂 实验室用水应符合G B 6 6 8 2 中二级用水的规格，使用试剂除特殊规定外，应为分析纯。4.1 高氯酸 优级纯(p l.6 7 g/m L)e4.2 硝酸 优级纯(p l.4 2 g/m L)e4.3 环己 烷 p 0.7 7 8-0.8 0 g/m L.4.4 盐酸优级纯(1+3),4.5 盐酸 c(H c=0.1 m o l/I。4.6 氨水 p 0.9 0 g/m L.4.7 盐酸径胺一 乙二胺四乙酸二钠(E D T A)溶液 称取1 0 g E D T A溶于5 0 0 m L 水中，加入2 5 g 盐酸轻胺使其溶解，用水稀至1 0 0 0 m L,4.8 2,3 一 二氨基蔡(D A N)溶液 称取D A N O.1 g 于1 5 0 m L 烧杯中，加入1 0 0 m L O.1 m o l/L 盐酸使其溶解，转移到2 5 0 m L 分液漏斗，加入2 0 m l,环己烷(4.3)振荡1 m i n，待分层后弃去环己 烷，水相重复用环己 烷处理2-3 次。水相放入棕色瓶中上面加盖 3 m m厚的环己烷，于暗处保存，此液可使用数周。4.9 硒标准贮备溶液 称取硒粉(纯度9 9%以上)2 5 m 郊精确至0.0 1 m g)，入1 0 0 m L烧杯中，加入1 0 m L硝酸加热溶解，冷至室温，用水转移至1 0 0 0 m L容量瓶中 并稀至刻度，摇匀，此液1 m L 含2 5.0 0 p g 的硒。国家技术监督局1 9 9 2 一 1 1-2 4 批准1 9 9 3-0 6 一 0 1 实施G B/T 1 3 8 8 3 一 9 24.1 0 硒标准工作溶液 吸取(4.9)溶液 1.0 0 ml、入 5 0 mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟5 m i n，取下稍冷，加1 m L水和1 m L盐酸(4.4)摇匀，放置 1 0 m i n 用盐酸(4.5)转移至2 5 0 m L容量瓶中并稀至刻度摇匀，此液1.0 0 M I含硒0.1 p g.4.1 1 甲酚红 0.4 g/L 水溶液，称取。.1 g甲酚红入4 0 0 m L烧杯中，加少许水加氨水(4.6)使其溶解用水稀至2 5 0 m L,摇匀。5 仪器、设备5.1 荧光光度计 激发波长 3 6 5 3 8 5 n m,荧光发射波长 5 2 0 -5 2 5 n m,l c m石英比色杯。5.2 实验室用样品粉碎机 标准分析筛孔径(0.4 2,0.2 5 m m).5.3 分析天平 分度值。.0 0 0 1 g,5.4 可调温电炉(6 0 0 W)或电热板(3 0 0 0 W)o5.5 高型烧杯5 0 m L和相应大小的表面皿。5.6 具塞比色管5 0 m L,5.7 刻度吸量管 2 m l,1 0 m L,6 试样的制备 取已粉碎至0.4 2 m m的试样4 0 5 0 g 人2 5 0 m L烧杯中加水至能搅动的糊状，在搅拌器上搅1 0-1 5 m i n，倒在小搪瓷盘中 铺平，放入烘箱7 0 0C 烘干，粉碎机上磨至。.2 5 m m,混匀装入密封容器中备用，防止试样成分变化。了 分析步骇7.1 试样测定(配合饲料、浓缩料、单一饲料)称取已 制备好的试样约1 g，精确至。0 0 0 1 g(0.4 p g S e)，放入5 0 m L高型烧杯中，用少量水润湿试样加硝酸(4.2)1 0 m L,轻摇烧杯使试样散开，加盖表面皿放到电热板(5.4)上低温加热见反应开始(泡沫开始上冒)，切断电源或取下待剧烈反应缓解(气泡不上涌)后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5 m L 左右，取下稍冷加入5 m L 高氯酸(4.1)继续加热至剧烈小气泡冒完，高氯酸冒 烟;取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯壁，去掉表面皿，将烧杯置电热板上先低温蒸发水分，再升温至高氯酸冒 烟并保持5 1 0 m i n，取下稍冷，加入 1 m L水和 1 m L盐酸(4.4)，摇匀，放置 1 0 m i n，水稀至3 0 m L左右，加二滴甲酚红(4.1 1)，用氨水(4.6)中和至黄色，再用盐酸(4.4)中和至橙色(p H 1.5 -2)，加入3 m L盐酸羚胺溶液(4.7)摇匀，用盐酸(4.5)转移到5 0 m L比色管中(5.6)，加2 m L D A N溶液(4.8),盖好塞子，摇匀，松动塞子，置于1 0 0 水中 保持5 m i n。取出放人冷水中 迅速冷却至室温，用盐酸(4.5)稀至5 0 m L，加5 m L 环己 烷(4.3)振荡1 m i n，静置分层后，用吸管小心吸取上部环己 烷入1 c m石英杯中，置入荧光光度计内于激发波长3 7 5 -3 8 0 n m，发射波长5 2 0 -5 2 5 n m测其荧光强度，在标准曲线上查得试料中 硒的含量。同时做空白 试验(消化时应戴防护眼镜)。7，2 高含量硒样品(预混合料)的测定 对于每千克含硒在1 m g 以上含有机物的样品.，按(7.1)进行至加入1 m L水和1 m L 盐酸(4.4)摇匀，放置1 0 m i n 后将消化液稀释至足够体积，然后取部分溶液(S e 提0.4 p g)进行测定。对于以石粉为载体的预混料，称取 1-5 g 样品(精确到。.0 0 0 1 g)，于2 5 0 m 1烧杯中，加入 2 0 m L水和 2 5 m 1 一 硝酸G s/T 1 3 8 8 3 一 9 2(4.2)(逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部加入)，盖表面皿，置电热板上煮沸，低温沸腾3 0 m i n,取下冷却，用水转移到1 0 0-5 0 0 m L 容量瓶中 稀释至刻度，摇匀，取部分澄清液(S e(0.4 p g)入5 0 m l 一 高型烧杯中，加入5 m L高氯酸(4.1)，以下按 7.1 加高氯酸后程序进行。7.3 工作曲线的绘制 取0.0 0,0.5 0,1.0 0,1.5 0,2.0 0,3.0 0 m L硒标准溶液(4.1 0)，分别入5 0 m L具塞比 色管中，加入3 m l-盐酸经胺溶液(4.7),2 滴甲 酚红指示剂(4.1 1),以下按7.1 用氨水中和起操作进行，以硒量为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制工作曲线。8 分析结果计算和表述 硒的含量(m g/k g)按下式计算:S e(m g/k g)=式中:，t 自 工作曲线上查得的硒量，I t g;V o-一 试液的总体积，m L;V,分取试液的体积，m L;。试料的质量，9。所得结果应表示至三位小数:0.0 0 1 m g/k g,m,V amo V,9 允许差 室内每个试样应称两份试料进行测定，以其算术平均值为分析结果，其间分析结果的相对偏差应不大于下表所列允许差。硒含量，m g/k g 蕊0.1 0 00.1 0 0-0.2 0 0 0.2 0 0-0.4 0 0 0.4 0 0允许偏差，%卜UOC哎d左口曰心11附加说明:本标准由中华人民共和国商业部、农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验测试中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人邹大琼、詹志春、吴芳桂。