GBT 12388-1990 食物中维生素A和维生素E的测定方法.pdf

GB 123881990 中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准 食物中维生素食物中维生素 A 和维生素和维生素 E 的的 测定方法测定方法 Method for determination of retinol and Method for determination of retinol and tocopherol in foods tocopherol in foods GB/T 123881990GB/T 123881990 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定食物中维生素 A 和维生素 E。本标准适用于食物中维生素 A 和维生素 E 的测定。第一篇 高效液相色谱法 2 原理 样品中的维生素 A 及维生素 E 经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法 C2n反相柱将维生素 A 和维生素 E 分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。最小检出量分别为 VA：0.8ng，-B：91.8ng：-E：36.6ng：-E：20.6ng。3 试剂 实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。31 无水乙醚：不含有过氧化物。311 过氧化物检查方法：用 5mL 乙醚加 1mL 10%碘化钾溶液，振摇 1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加 4 滴 0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该醚需处理后使用。312 去除过氧化物的方法：熏蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许，弃去 10%蒸馏水和 10%残留液。32 无水乙醇：不得含有醛类物质。321 检查方法：取 2mL 银氨溶液于试管中，加入少量乙醛，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。322 脱醛方法：取 2g 硝酸银溶于少量水中，取 4g 氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入 1L 乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的 50mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。33 无水硫酸钠。34 甲醇：重蒸后使用。35 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。36 10%抗坏血酸溶液（m/V）：临用前配制。37 1：1 氢氧化钾溶液。38 10%氢氧化钠溶液（m/V）。39 5%硝酸银溶液（m/V）。1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定食物中维生素 A 和维生素 E。本标准适用于食物中维生素 A 和维生素 E 的测定。第一篇 高效液相色谱法 2 原理 样品中的维生素 A 及维生素 E 经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法 C2n反相柱将维生素 A 和维生素 E 分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。最小检出量分别为 VA：0.8ng，-B：91.8ng：-E：36.6ng：-E：20.6ng。3 试剂 实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。31 无水乙醚：不含有过氧化物。311 过氧化物检查方法：用 5mL 乙醚加 1mL 10%碘化钾溶液，振摇 1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加 4 滴 0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该醚需处理后使用。312 去除过氧化物的方法：熏蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许，弃去 10%蒸馏水和 10%残留液。32 无水乙醇：不得含有醛类物质。321 检查方法：取 2mL 银氨溶液于试管中，加入少量乙醛，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。322 脱醛方法：取 2g 硝酸银溶于少量水中，取 4g 氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入 1L 乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的 50mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。33 无水硫酸钠。34 甲醇：重蒸后使用。35 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。36 10%抗坏血酸溶液（m/V）：临用前配制。37 1：1 氢氧化钾溶液。38 10%氢氧化钠溶液（m/V）。39 5%硝酸银溶液（m/V）。中华人民共和国卫生部 19900319 批准 19901201 实施 中华人民共和国卫生部 19900319 批准 19901201 实施 GB 123881990 310 银氨溶液：加氨水至 5%硝酸银溶液中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加 10%氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。310 银氨溶液：加氨水至 5%硝酸银溶液中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加 10%氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。311 维生素 A 标准液：视黄醇（纯度 85%）或视黄醇乙酸酯（纯度 90%）经皂化处理后使用，用脱醛乙醇溶解维生素 A 标准品，使其浓度大约为 1mL 相当于 1mg 视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。311 维生素 A 标准液：视黄醇（纯度 85%）或视黄醇乙酸酯（纯度 90%）经皂化处理后使用，用脱醛乙醇溶解维生素 A 标准品，使其浓度大约为 1mL 相当于 1mg 视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。312 维生素 E 标准液：-生育酚（纯度 95%），-生育酚（纯度 95%），-生育酚（纯度 95%）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约为 1mL 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素 E 的准确浓度。312 维生素 E 标准液：-生育酚（纯度 95%），-生育酚（纯度 95%），-生育酚（纯度 95%）。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约为 1mL 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素 E 的准确浓度。313 内标溶液：称取苯并芘纯度 98%，用脱醛乙醇配制成每 1mL 相当于 10g 苯并e芘的内标溶液。313 内标溶液：称取苯并芘纯度 98%，用脱醛乙醇配制成每 1mL 相当于 10g 苯并e芘的内标溶液。314 pH114 试纸。314 pH114 试纸。4 仪器和设备 4 仪器和设备 41 实验室常用设备。41 实验室常用设备。42 高压液相色谱仪带紫外分光检测器。42 高压液相色谱仪带紫外分光检测器。43 旋转蒸发器。43 旋转蒸发器。44 高速离心机 44 高速离心机 441 小离心管：具塑料盖 1.53.0mL 塑料离心管（与高速离心机配套）。441 小离心管：具塑料盖 1.53.0mL 塑料离心管（与高速离心机配套）。45 高纯氮气。45 高纯氮气。46 恒温水浴锅。46 恒温水浴锅。47 紫外分光光度计。47 紫外分光光度计。5 操作步骤 5 操作步骤 51 样品处理 51 样品处理 511 皂化 511 皂化 称取 110g 样品（含维生素 A 约 3g，维生素 E 各异构体约为 40g）于皂化瓶中，加 30mL 无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加 5mL10%抗坏血酸，苯并e芘标准液 2.00mL，混匀。加 10mL1：1 氢氧化钾，混匀。于沸水浴上回流 30min 使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。称取 110g 样品（含维生素 A 约 3g，维生素 E 各异构体约为 40g）于皂化瓶中，加 30mL 无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加 5mL10%抗坏血酸，苯并e芘标准液 2.00mL，混匀。加 10mL1：1 氢氧化钾，混匀。于沸水浴上回流 30min 使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。512 提取 512 提取 5121 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用 50mL 水分 23 次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约 100mL 乙醚分两次皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣。可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去水层。5121 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用 50mL 水分 23 次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约 100mL 乙醚分两次皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣。可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去水层。513 洗涤 513 洗涤 5131 用约 50mL 水洗分液漏斗中的乙醚层，用 pH 试纸检验直至水层不显碱性（最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加）。5131 用约 50mL 水洗分液漏斗中的乙醚层，用 pH 试纸检验直至水层不显碱性（最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加）。514 浓缩 514 浓缩 5 1 4 1 将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约 5g）滤入与旋转蒸发器配套 250300mL 球形蒸发瓶内，用约 10mL 乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠 3 次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于 65水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约 2mL 乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。立即加入 2.00mL 乙醇，充分混合，溶解提取物。5 1 4 1 将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约 5g）滤入与旋转蒸发器配套 250300mL 球形蒸发瓶内，用约 10mL 乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠 3 次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于 65水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约 2mL 乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。立即加入 2.00mL 乙醇，充分混合，溶解提取物。515 带乙醇液移入一小塑料离心管中（4.4.1），离心 5min（5 000rpm）。上清液供色谱分析。如果样品中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，515 带乙醇液移入一小塑料离心管中（4.4.1），离心 5min（5 000rpm）。上清液供色谱分析。如果样品中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，中华人民共和国卫生部 19900319 批准 19901201 实施 GB 123881990 再用乙醇重新定容。并记下体积比。再用乙醇重新定容。并记下体积比。52 标准曲线的制备 52 标准曲线的制备 521 维生素 A 和维生素 E 标准浓度的标定方法 521 维生素 A 和维生素 E 标准浓度的标定方法 取维生素 A 和各维生素 E 标准若干微升，分别稀释至 3.00mL 乙醇中，并分别按给定被长测定各维生素的吸光值，用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如下表所示。取维生素 A 和各维生素 E 标准若干微升，分别稀释至 3.00mL 乙醇中，并分别按给定被长测定各维生素的吸光值，用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如下表所示。表 1 表 1 标准 标准 加入标准的量 加入标准的量 S，L S，L 比吸光系数 比吸光系数%1cmE 波长 波长，nm，nm 视黄醇 视黄醇-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚 10.00 10.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 1 835 1 835 71 71 92.8 92.8 91.2 91.2 325 325 294 294 298 298 298 298 浓度计算：浓度计算：311000.31001=SEAX（1）（1）式中：X 式中：X1其维生素浓度，g/mL；A维生素的平均紫外吸光值；S加入标准的量，L；E某种维生素 1%比吸光系数；1其维生素浓度，g/mL；A维生素的平均紫外吸光值；S加入标准的量，L；E某种维生素 1%比吸光系数；31000.3S标准液稀释倍数。标准液稀释倍数。522 标准曲线的制备 522 标准曲线的制备 本方法采用内标法定量。把一定量的维生素 A、-生育酚、-生育酚、-生育酚及内标苯并e芘液混合均匀。选择合适灵敏度；使上述物质的各峰高约为江量程 70%，为高浓度点。高浓度的 本方法采用内标法定量。把一定量的维生素 A、-生育酚、-生育酚、-生育酚及内标苯并e芘液混合均匀。选择合适灵敏度；使上述物质的各峰高约为江量程 70%，为高浓度点。高浓度的21为低浓度点（其内标苯并e芘的浓度值不变），用此二种浓度的混合标准