GBT 13086-1991 饲料中游离棉酚的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中游离棉酚 的测定方法G B 1 3 0 8 6 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r m i n a t i o n o f f r e e g o s s y p o l i n f e e d s本标准参照采用国际标准I S O 6 8 6 6-1 9 8 5 动物饲料中游离的和总棉酚的测定方法。主腼内容与适用范围本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。本标准适用于棉籽粉、棉籽饼(粕)和含有这些物质的配合饲料(包括混合饲料)中 游离棉酚的测定。原理在3-氨基一 1 一 丙醇存在下用异丙醉与正己 烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长4 4 0 n m处进行比色测定。试荆和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。异丙醇C(C H3)2 C H O H,H G 3-1 1 6 7),正己烷。冰乙酸(G B 6 7 6),苯胺(C s H,N H,G B 6 9 1):如果测定的空白试验吸收值超过。.0 2 2 时，在苯胺中加入锌粉进行蒸弃去开始和最后的1 0%蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在(0-v 4 0C)冰箱中，该试剂可稳定几个 3-氨基一 1 一 丙醇(H 2 N C H,C H 2 C H 2 O H),异丙醉一 正己烷混合溶剂:6:4(V/V),溶剂A;量取约5 0 0 m L异丙醉、正己烷混合溶剂(3.6),2 m L 3-氨基一 1 一 丙醇(3.5),8 m L冰乙酸3)和5 0 m L水于1 0 0 0 m L的容量瓶中，再用异丙醇一 正己 烷混合溶剂(3-6)定容至刻度。，.n了q月，。八划，了3.3.33.馏月33.3.(3仪器、设备分光光度计:有1 0 mm比色池，可在4 4 0 n m处测量吸光度。振荡器:振荡频率1 2 0 1 3 0 次/m i n往复)。恒温水浴。具塞三角烧瓶:1 0 0,2 5 0 m L,容量瓶:2 5 mL(棕色)。吸量管:1,3,1 0 m L,移液管:1 0,5 0 m L.漏斗:直径5 0 m m.441424.34445464748国家技术监督局1 9 9 1 一 0 7 门6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施G B 1 3 0 8 6 一 9 14.9 表玻璃:直径6 0 m m,5 试样制备 采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2 k g，四分法缩分至约2 5 0 g，磨碎，过2.8 m m孔筛，混匀，装人密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6 测定步骤6.1 称取1-2 g 试样(精确到。.0 0 1 g)置于2 5 0 m l具塞三角烧瓶(4-4)中，加入2 0 粒玻璃珠，用移液管(4-7)准确加入5 0 m L 溶剂A(3.7)，塞紧瓶塞，放入振荡器(4-2)内 振荡1 h(每分钟1 2 0 次左右)。用干燥的定墩滤纸过滤，过滤时在漏斗(4.8)上加盖一表玻璃(4-9)以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于1 0 0 m L具塞三角烧瓶(4.4)中。6.2 用吸量管(4.6)吸取等量双份滤液5-1 0 m L(每份约含5 0 1 0 0 y g 的棉酚)分别至两个2 5 m L棕色容量瓶(4-5)a 和b中，如果需要，用溶剂A(3.7)补充至1 0 m L o6.3 用异丙醇一 正己 烷混合溶剂(3-6)稀释瓶a 至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比 溶液。6.4 用移液管(4-7)吸取2 份1 0 m L的溶剂A(3.7)分别至两个2 5 m L棕色容量瓶(4.5)a o 和b。中。6.5 用异丙醇一 正己 烷混合溶剂(3-6)补充瓶a。至刻度，摇匀，该溶液用作空白 测定液的参比溶液。6.6 加2.0 m L苯胺(3-4)于容量瓶b 和6。中，在沸水浴(4.3)上加热3 0 m i n 显色。6.7 冷却至室温，用异丙醇一 正己烷混合溶剂(3-6)定容，摇匀并静置1 h,6.8 用1 0 m m比色池，在波长4 4 0 n m处，用分光光度计(4-1)以a。为参比溶液测定空白测定液b。的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b 的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度A。了 测定结果7飞 计算公式A X 1 2 5 0 X 1 0 0 0 A X 1.2 5a X m X Va mVX 1 0 6式中:X一 一游离棉酚含量,m g/k g;A一 一校正吸光度;，试样质量+g;V一 一测定用滤液的体积，m L;a 质量吸收系 数，游离棉 酚为 6 2.5 c m-g-L.7.2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表 示到2 0 m g/k g.了.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值 在游离棉酚含量小于5 0 0 m g/k g 时，不得超过平均值的1 5%;在游离棉酚含量大于5 0 0 m g/k g 而小于7 5 0 m g/k g 时，不得超过7 5 m g/k g;在游离棉酚含量超过7 5 0 m g/k g 时，不得超过平均值的1 0%0G B 1 3 0 8 6 一 9 1附加说明:本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草本标准主要起草人姜云侠、李建凡、高振川。