GB 29686-2013 食品安全国家标准 猪可食性组织中阿维拉霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

GB 29686-2013食品安全国家标准猪可食性组织中阿维拉霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了猪可食性组织中阿维拉霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪的肌肉、脂肪/皮、肝脏和肾脏中阿维拉霉素残留量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中残留的阿维拉霉素，用丙酮提取，氢氧化钠溶液水解，再用乙酸乙酯提取，氧化铝固相萃取柱净化，以二氯甲氧苯酸为内标物，液相色谱-串联质谱APCI测定，内标法定量。4试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1阿维拉霉素、阿维拉霉素残留标示物DIA标准品：含量98%。4.2内标物：二氯甲氧苯酸标准品：含量98%。4.3甲醇：色谱纯。4.4正已烷。4.5乙腈：色谱纯。4.6乙酸乙酯。4.7丙酮。4.8甲酸。4.9氢氧化钠。4.10磷酸。4.11中性氧化铝固相萃取柱：1000mg/6mL,或相当者。4.121mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g,用水溶解并稀释至100mL。4.13洗脱液：取甲酸5mL,用乙腈溶解并稀释至100mL。4.141mg/mL阿维拉霉素和阿维拉霉素残留标示物DIA标准贮备液：精密称取阿维拉霉素和阿维拉霉素残留标示物DIA各10mg,分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的阿维拉霉素和阿维拉霉素残留标示物DIA标准贮备液。24保存，有效期1个月。GB29686-2013重复提取两次，合并3次上清液，于60旋转蒸发至干，用1mol/L氢氧化钠溶液4mL溶解残余物，转至50mL离心管中，于70水浴2h,取出，用85%磷酸调pH至1.0，加乙酸乙酯4mL,混匀，于6000r/min离心10min,取上清液于另一离心管中，重复两次，合并3次上清液，加2g/mL二氯甲氧苯酸内标0.5mL(空白试料除外)，混匀备用。7.2净化氧化铝萃取柱用乙酸乙酯10mL活化，取备用液过柱，分别用正己烷5mL、乙酸乙酯5mL和甲醇5mL淋洗，用洗脱液洗脱两次，每次7mL,收集洗脱液，于50旋转蒸发至干，用甲醇1.0mL溶解残余物，涡旋混匀，供液相色谱-串联质谱法测定。7.3标准曲线的制备精密量取10g/mL阿维拉霉素残留标示物DIA标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为5、50、100、200、400和800g/L的系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.4测定7.4.1液相色谱条件7.4.1.1色谱柱：C18(150mm4.6mm,粒径5m),或相当者。7.4.1.2流动相：甲醇+水(50+50，体积比)。7.4.1.3:0.6mL/min。7.4.1.4进样：10g/L。7.4.1.5柱温：40。7.4.2质谱条件7.4.2.1离子源：APCI。7.4.2.2扫描方式：负离子扫描。7.4.2.3检测方式：选择反应监测。7.4.2.4蒸发温度：400。7.4.2.5离子传输管温度：275。7.4.2.6鞘气压力：25arb。7.4.2.7辅助气压力：5arb。7.4.2.8选择反应监测的优化参数见表1。表1阿维拉霉素选择反应监测的优化参数相对保留时间母离子定性离子及碰撞能量定量离子及碰撞能量药物名称min质量数eVeV阿维拉霉素残留7.10249249189(23)249205(16)标示物DIA249205(16)二氯甲氧苯酸8.80219219159(18)219175(8)219145(15)3GB29686-20137.4.3测定法7.4.3.1定性测定通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%；试样特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断试样中存在相应的被测物。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差%相对离子丰度502050102010允许的相对偏差土20士25土30士50将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。7.4.3.2定量测定取试样溶液和标准溶液，按外标法，以峰面积定量，标准溶液及试样溶液中的阿维拉霉素响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，阿维拉霉素标准溶液和空白添加试样溶液中特征离子质量色谱图见附录A。7.5空白试验除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8结果计算与表述试料中阿维拉霉素残留标示物(DIA)的残留量按式(1)计算：AXcs XciXAs XVX=(1)Ascs4A:m式中：X供试试料中DIA的残留量，单位为微克每千克（g/kg);A试样溶液中DIA的色谱峰面积；cs标准溶液中DIA的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);c,试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);As标准溶液中内标物的色谱峰面积；V样液最终定容体积，单位为毫升(mL);As标准溶液中DIA的色谱峰面积；cs2标准溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);A:试样溶液中内标物的色谱峰面积；m供试试料质量，单位为克(g)。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。4