GBT 13089-1991 饲料中唑烷硫酮的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法G B 1 3 0 8 9 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f o-s a n l i d i n e t h i o n ei n f e e d s 本标准参照采用国际标准I S O 5 5 0 4-1 9 8 3 含油种子及其去油后饼粕中异硫氛酸醋和嗯哩烷硫酮的测定。1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法。本标准适用于菜子饼粕和配合饲料中i l 哇烷硫酮的测定。2 原理 饲料中的硫葡萄糖昔被硫葡萄搪昔酶(芥子酶E C 3.2.3.1)水解，再用乙醚萃取生成的嗯哇烷硫酮，用紫外分光光度计测定。3 试荆和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为燕馏水或相应纯度的水。3.1 乙醚:光谱纯或分析纯。3.2 去泡剂:正辛醇(C.H O H),3.3 p H 7.0 缓冲液:取3 5.3 m L 0.1 m o l/L柠檬酸(C 5 H 8 0 7-H,O,H G 3-1 1 0 8)溶液(2 1.0 1 g/L)于一个2 0 0 ml,容量瓶中，再用0.2 m o l/L磷酸氢二钠(G B 1 2 6 3)溶液调节p H至7.0.3.4 酶源:用白芥(S i n a p i s a l b a L.)种子(7 2 h内 发芽率必须大于8 5%，保存期不得超过两年)制备。将白芥籽磨细，使8 0%通过0.2 8 m m孔径筛子，用正己烷或石油醚(沸程4 0-6 0 C)提取其中 脂肪，使残油不大于2%,操作温度保持3 0 以下，放通风橱于室温下使溶剂挥发。此酶源置具塞玻璃瓶中4 下保存，可用6 周。4 仪器、设备4.14.24.34.44.54.64.74.84.9分析天平:感量0.0 0 0 1 g,样品筛:孔径。.2 8 m m.样品磨。玻璃干燥器。恒温干燥箱:1 0 3 士2 0c,三角烧瓶:2 5,1 0 0,2 5 0 m L,容量瓶:2 5,1 0 0 m L.烧杯:5 0 m l。分液漏斗:5 0 m L o国家技术监督局 1 9 9 1 一 0 7 一 1 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施G B 1 3 0 8 9 一 9 14 门0 移液管:2 m L.4.1 1 振荡器:振荡频率1 0。次/m i n(往复)4.1 2 分光光度汁:有1 0 m m石英比色池，可在2 0 0 3 0 0 n m处测量吸光度。5 试样制备采集具有代表性的样品至少5 0 0 g，四 分法缩分至5 0 g，再磨细，使其8 0%能通过。.2 8 m m筛。6 测定步骤6.1 称取试样(菜籽饼粕1.1 g，配合饲料5.5 g)于事先干燥称重(精确到。.0 0 1 g)的烧杯中，放入恒温干燥箱(4-5)，在1 0 3 f2 下烘烤至少8 h，取出置干燥器(4-4)中 冷至室温，再称重，精确到。.0 0 1 g o6.2 试样的酶解 将干燥称重的试样全倒入一2 5 0 m L三角烧瓶(4-6)中，加入7 0 m L沸缓冲液(3-3)，并用少许冲洗烧杯，使冷却至3 0 C，然后加入。.5 g 酶源(3-4)和几滴去泡剂(3-2)，于室温下振荡2 h。立即将内 容物定量转移至1 0 0 m l _ 容量瓶(4.7)中，用水洗涤三角烧瓶(4.6)，并稀释至刻度，过滤至1 0 0 m L三角烧瓶(4-6)中，滤液备用。6.3 试样测定 取上述滤液(菜籽饼粕1.0 m L，配合饲料2.0 m L)，至5 0 m L分液漏斗(4-9)中，每次用1 0 m L乙醚(3.1)提取两次，每次小心从上面取出上层乙醚。合并乙醚层于2 5 m L容量瓶(4-7)中，用乙醚(3.1)定容至刻度。从2 0 0 n m至2 8 0 n m测定其吸光度值，用最大吸光度值减去2 8 0 n m处的吸光度值得试样测定吸光度值AE。6.4 试样空白测定(菜籽饼粕此项免去，A。为零)按6.1,6.2,6.3 同样操作，只 加试样不加酶源(3.4),测得值为试样空白 吸光度值Ad,6.5 酶源空白测定 按6.1,6.2,6.3 同样操作，不加试样只加酶源 3.4),测得值为酶源空白 吸光度值Ac了 测定结果了.1 计算公式 ，、行_ _ _IA二一 A。一 A X=(A E 一A。一A c)X C P X 2 5 X 1 0 0 X 1 0-X-二:生 一 一 二 些 一 二=X 2 0.5 刀 子刀s式中:X试样中P,哇烷硫酮的含量，以每克绝干样中P,哇烷硫酮的毫克数表示;A t 试样测定吸光度值;A 试样空白 吸光度值;A c 酶源空白吸光度值;C.p 转换因素，吸光度为1 时，每升溶液中p 烷硫酮的毫克数，其值为8.2 s y n 试样绝干质量+H 若试样测定液经过稀释，计算时应予考虑。7.2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到0.0 1 m g/g o了.3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值:在嗯哇烷硫酮含量小于或等于。.2 0 m g/H时，不得超过平均值的2 0/;G B 1 3 0 8 9 一 9 1在嗯哇烷硫酮含量大于0.2 0 m g/g 而小于。.5 0 m g/g 时，不得超过平均值的1 5 写;在嗯哇烷硫酮含量等于或大于。.5 0 m g/g时，不得超过平均值的1 0 0 0 0附加说明:本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人李建凡、姜云侠、高振川。