GB 23200.63-2016 食品安全国家标准 食品中噻酰菌胺残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法.pdf

ICS 点击此处添加 ICS 号 点击此处添加中国标准文献分类号 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 标 准 GB GB 23200.632016 代替SN/T 25142010 食品安全国家标准 食品中噻酰菌胺残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 National food safety standards Determination of tiadinil residue in foods Liquid chromatography-mass spectrometry 2016-12-18 发布 2017-06-18 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 发布 国家食品药品监督管理总局 GB 23200.632016 I 前前 言言 本标准代替 SN/T 2514-2010 进出口食品中噻酰菌胺农药残留量的测定液相色谱-质谱质谱法。本标准与 SN/T 2514-2010 相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称和范围中“进出口食品”改为“食品”；标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 2514-2010。GB 23200.632016 1 食品安全国家标准食品安全国家标准 食品中噻酰菌胺农药残食品中噻酰菌胺农药残留量的测定留量的测定 液相色谱质谱液相色谱质谱/质谱法质谱法 1 1 范围范围 本标准规定了食品中噻酰菌胺农药残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于生菜、胡萝卜、菜心、大米、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱、茶叶、蜂蜜中噻酰菌胺农药残留的定性鉴定/定量测定，其它食品可参照执行。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 原理原理 试样用乙酸乙酯提取，凝胶色谱（GPC）和固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。4 4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.14.1 试剂试剂 4.1.1 环己烷（C6H12，110-82-7）：色谱纯。4.1.2 乙酸乙酯（C4H8O2，141-78-6）：色谱纯。4.1.3 乙腈（C2H3N，75-05-8）：色谱纯。4.1.4 甲醇（CH4O，67-56-1）：色谱纯。4.1.5 无水硫酸钠（Na2SO4，15124-09-1）：650 灼烧 4 h，在干燥器内冷却至室温，储于密封瓶中备用。4.1.6 氯化钠（NaCl，7647-14-5）。4.2 4.2 标准品标准品 4.2.1 噻酰菌胺（tiadinil）标准品（C11H10ClN3OS，CAS 号：223580-51-6）：纯度97.0%。4.4.3 3 标准溶液配制标准溶液配制 4.3.1 噻酰菌胺农药标准储备液：准确称取适量噻酰菌胺农药标准物质，用乙腈配制成浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备液。4.3.2 噻酰菌胺标准中间溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙腈稀释至浓度为 10.0 ug/mL 的标准中间溶液。4.3.3 噻酰菌胺标准工作液：使用前根据需要将标准中间溶液用各种样本的空白基质稀释成适当浓度的标准工作液。4.4.4 4 材料材料 4.4.1 氨基固相萃取柱：200 mg，3 mL 和 500 mg，3 mL，或相当者。临用前用乙腈将氨基柱（200 mg）活化 2 次，每次 2 mL。在氨基柱(500 mg)上填装 0.5 g 无水硫酸钠，临用前用乙酸乙酯活化 2 次，每次 2 mL。4.4.2 CHROMABOND XTR 固相萃取柱（大孔径硅藻土填料）：3000 mg，15 mL，或相当者。4.4.3 微孔滤膜：0.2 m 和 0.45 m，有机相。5 5 仪器和设备仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2 凝胶渗透色谱仪。GB 23200.632016 2 5.3 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。5.4 高速均质机。5.5 高速低温冷冻离心机：10000 r/min。5.6 旋转蒸发仪。5.7 氮气吹干仪。5.8 旋涡震荡器。5.9 聚四氟乙烯塑料离心管：50 mL，具塞。5.10 玻璃刻度试管，5 mL 和 10 mL，具塞。5.11 鸡心瓶：50 mL。6 6 试样制备与保存试样制备与保存 6.1 6.1 试样制备试样制备 6.1.1 6.1.1 生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄 取有代表性样品约500 g，将其切碎后，用捣碎机加工成浆状。混匀，装入洁净容器，密封，标明标记。6.1.2 6.1.2 大米、板栗、茶叶大米、板栗、茶叶 取有代表性样品约500 g，用粉碎机粉碎并通过孔径2.0 mm圆孔筛。混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记。6.1.3 6.1.3 牛肉、鸡肉、羊肝、罗非鱼牛肉、鸡肉、羊肝、罗非鱼 取有代表性样品约 500 g，用绞肉机绞碎，混匀，装入洁净容器,密闭，标明标记。6.1.4 6.1.4 番茄酱番茄酱 取有代表性样品约500 g，混匀，装入洁净容器,密闭，标明标记。6.1.6.1.5 5 蜂蜜蜂蜜 取代表性样品约 500 g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过 60 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时必须注意防止水分挥发。装入洁净容器，密封，标明标记。注：以上样品取样部位按GB 2763附录A执行。6.2 6.2 试样保存试样保存 茶叶、蜂蜜、粮谷及坚果类等试样于04 保存；水果蔬菜类和动物源性食品等试样于-18 以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 7 分析步骤分析步骤 7.1 7.1 提取提取 7.1.1 7.1.1 生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加 15.0 mL 乙酸乙酯,匀质提取 1 min，另取一个 50 mL 离心管，加入 10.0 mL 乙酸乙酯洗匀质器刀头，合并均质液。加入 10 g 无水硫酸钠，振荡10 min。提取液 10000 r/min 离心 5 min，吸取 10.0 mL 上清液，冰箱 0 以下放置 10 h，过 0.45 m 有机滤膜，待凝胶渗透色谱净化。7.1.7.1.2 2 大米大米 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 10.0 mL 水，浸泡 20 min，加 15.0 mL 乙酸乙酯，匀质提取 1 min，另取一个 50 mL 离心管，加入 10.0 mL 乙酸乙酯洗匀质器刀头，合并均质液。加入 10 g 无水硫酸钠，振荡 10 min。将样本提取液 10000 r/min 离心 5 min，吸取 10.0 mL 上清液，冰箱 0 以下放置 10 h，再过 0.45 m 有机滤膜，待凝胶渗透色谱净化。7.1.7.1.3 3 茶叶茶叶 称取 2 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 10.0 mL 水，浸泡 20 min，再加入 1 g 无水硫酸钠，涡旋振荡 1 min。加入 10.0 mL 乙酸乙酯，涡旋振荡 2 min，将样本提取液 4000 r/min 离心 5 min，吸取上清液。再加入 10.0 mL 乙酸乙酯，涡旋振荡 2 min，4000 r/min 离心 5 min，重复提取一次，合并二次的上清液，45吹氮浓缩至 2 mL 左右，定容至 10 mL，过 0.45 m 有机滤膜，待凝胶渗透色谱净化。GB 23200.632016 3 7 7.1.1.4 4 蜂蜜蜂蜜 称取 2.0 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加 3 mL 水，0.5 g 氯化钠，震荡混匀，过 XTR固相萃取柱。上样后，将样本液保持 5 min，用 35 mL 乙酸乙酯分多次淋洗，流速控制为 1.0 mL/min，收集滤液于 50 mL 鸡心瓶中，在 45 下减压浓缩至约 0.5 mL，待净化。7.2 7.2 净化净化 7.2.1 7.2.1 生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱、大米、茶叶生菜、胡萝卜、菜心、柑橘、葡萄、板栗、牛肉、羊肝、鸡肉、罗非鱼、番茄酱、大米、茶叶 将 7.1.1、7.1.2、7.1.3 的所得溶液 10 mL，过凝胶渗透色谱仪，收集 714 min 的流出液，操作浓缩装置，在 45下浓缩至近干，2 mL 乙腈定容，作为初净化液。将初净化液过氨基柱（200 mg）后，用乙腈洗涤收集瓶 3 次，每次 1 mL，洗液同样过柱，流速控制为 1 mL/min，收集全部过柱溶液于吹氮管中，在 45 下吹氮浓缩至近干，用甲醇定容至 1.0 mL，再加入 1.0 mL 去离子水，涡漩振荡均匀，过 0.2 m 有机滤膜，待测。7.2.2 7.2.2 蜂蜜蜂蜜 将浓缩液过氨基柱（500 mg），4 mL 乙酸乙酯分三次洗脱，流速控制为 1 mL/min，收集洗脱液于吹氮管中，在 45 下吹氮浓缩干，用甲醇定容至 1.0 mL，再加入 1.0 mL 去离子水，涡漩振荡均匀，过0.2 m 有机滤膜，待测。7.3 7.3 测定测定 7.3.1 7.3.1 凝胶色谱净化条件凝胶色谱净化条件 7.3.1.1 凝胶净化柱：Bio-Beads，S-X3，300 mm25（内径）mm；38 m75 m。7.3.1.2 浓缩时温度：45。7.3.1.3 流动相：环己烷乙酸乙酯(50+50，体积比)。7.3.1.4 定容试剂：乙腈。7.3.1.5 流速：4.7 mL/min。7.3.1.6 进样量：5 mL。7.3.2 LC7.3.2 LCMS/MSMS/MS质谱参考条件质谱参考条件 7.3.2.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱：Waters Atlantis Hilic Silica柱，3 m,3.0 mm（i.d）50 mm，或相当者。b）柱温：40。c）流动相：甲醇水(90+10，体积比)。d）流速：0.30 mL/min。e)进样量：10 L。7.3.2.2 质谱测定参考条件 参见附录 A。7.3.3 7.3.3 色谱测定与确证色谱测定与确证 根据样液中噻酰菌胺含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中噻酰菌胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，噻酰菌胺的保留时间约为 1.01 min。被测组分选择 1 个母离子，2 个以上子离子，在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准溶液中对应的保留时间偏差在 2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表 1 规定的范围，被确证的样品可判定为噻酰菌胺阳性检出。标准品的质谱图见附录 B 中图 B.1、B.2。表表 1 1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 7.4 7.4 空白实验空白实验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8 8 结果计算和表述结果计算和表述 用色谱数据处理机或按下式（1）计算试样中噻酰菌胺农药的含量，计算结果需扣除空白值。相对丰度（基峰）50%20%至 50%10%至 20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%GB 23200.632016 4 mAVcAXs.（1）式中：X 样液中噻酰菌胺残留含量，单位为