GB 23200.12-2016 食品安全国家标准 食用菌中440种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法.pdf

ICS X 中华人民共和国国家标准 GB 23200.122016 代替GB/T 232022008 食品安全国家标准 食用菌中 440 种农药及相关化学品 残留量的测定 液相色谱-质谱法 National Food Safety Standards Determination of 440 pesticides and related chemicals residues in mushrooms Liquid chromatography-mass spectrometry 2016-12-18 发布 2017-06-18 实施 GB 23200.122016 I 目 次 前言 1 范围1 2 规范性引用文件1 3 原理1 4 试剂和材料1 5 仪器和设备2 6 试样制备2 7 分析步骤2 8 结果计算和表述4 9 精密度4 10 定量限和回收率4 附录A（资料性附录）440种农药及相关化学品中、英文名称、方法定量限、分组、溶剂选择和混 合 标 准 溶 液 浓 度 表 5 附录B（资料性附录）440种农药及相关化学品保留时间、监测离子对、源内碎裂电压和碰撞气能 量 1 4 附录C（资料性附录）440种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图23 附录D（资料性附录）实验室内相对标准偏差43 附录E（资料性附录）实验室间相对标准偏差44 附录F（资料性附录）样品的添加浓度及回收率的实验数据45 GB 23200.122016 II 前言前言 本标准代替 GB/T 23202-2008 食用菌中 440 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法。本标准与 GB/T 23202-2008 相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准范围中增加“其它食用菌可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 23202-2008。GB 23200.122016 1 食品安全国家标准食品安全国家标准 食用菌中食用菌中 440440 种农药及相关化学品残留量的测定种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱液相色谱-质谱法质谱法 1 1 范围范围 本标准规定了滑子菇、金针菇、黑木耳和香菇中440种农药及相关化学品（参见附录A）残留量液相色谱-质谱测定方法。本标准适用于滑子菇、金针菇、黑木耳和香菇中440种农药及相关化学品的定性鉴别，364种农药及相关化学品的定量测定，其它食用菌可参照执行。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 原理原理 试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，固相萃取柱净化，用乙腈-甲苯溶液（3+1）洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4 4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.1 4.1 试剂试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱纯。4.1.2 丙酮（CH3COCH3，67-64-1）：色谱纯。4.1.3 甲苯（C7H8，108-88-3）：色谱纯。4.1.4 异辛烷（C8H18，540-84-1）：色谱纯。4.1.5 二氯甲烷（CH2Cl2，75-09-2）：色谱纯。4.1.6 正己烷（C6H14，110-54-3）：色谱纯。4.1.7 甲醇（CH3OH，67-56-1/170082-17-4）：色谱纯。4.1.8 氯化钠（NaCl，7647-14-5）：优级纯。4.1.9 无水硫酸钠（Na2SO4，7757-82-6）：分析纯。650灼烧 4h，贮于干燥器中，冷却后备用。4.24.2 溶液配制溶液配制 4.2.1 乙腈-甲苯溶液（3+1）：取 300 mL 乙腈，加入 100 mL 甲苯，摇匀备用。4.2.2 甲酸溶液（0.1%）：取 1000 mL 水，加入 1 mL 甲酸，摇匀备用。4.2.3 乙酸铵溶液（5mmol/L）：称取 0.385 g 乙酸铵，溶于 1000 mL 水溶液中，摇匀备用。4.2.4 乙腈-水溶液（3+2）：取 300 mL 乙腈，加入 200 mL 水，摇匀备用。4.3 4.3 标准品标准品 农药及相关化学品标准物质：纯度95%，参见附录 A。4.4 4.4 标准溶液配制标准溶液配制 4.4.4 4.1.1 标准储备溶液标准储备溶液 分别称取 5mg10mg（精确至 0.1mg）农药及相关化学品各标准物分别于 10mL 容量瓶中，根据标GB 23200.122016 2 准物的溶解度选甲醇、正己烷、丙酮、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度（溶剂选择参见附录 A）。标准储备溶液避光 4保存，保存期为一年。4.4.4 4.2.2 混合标准溶液（混合标混合标准溶液（混合标准溶液准溶液 A、B、C、D、E、F 和和 G）按照农药及相关化学品的保留时间，将 440 种农药及相关化学品分成 A、B、C、D、E、F 和 G 七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对 440 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 A。依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光 4保存，保存期为一个月。4.4.3 基质混合标准工作溶液基质混合标准工作溶液 农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A、B、C、D、E、F 和 G，用于做标准工作曲线。基质混合标准工作溶液应现用现配。4.5 4.5 材料材料 4.5.1 固相萃取柱：Sep-Pak CarbonNH21)，6mL，1g 或相当者。4.5.2 微孔过滤膜（尼龙）：13mm0.2m。5 5 仪器仪器和设备和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2 分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5.3 离心管：80 mL。5.4 移液器：1 mL 和 10 mL。5.5 鸡心瓶：100 mL。5.6 高速组织匀浆机：最低转速不低于 15 000 r/min。5.7 离心机：不低于 4 500r/min。5.8 旋转蒸发器。5.9 氮气吹干仪。5.10 样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。6 6 试样制备试样制备 食用菌样品取样部位按 GB 2763 附录 A 执行，将样品切碎混匀均一化制成匀浆，制备好的试样均分成两份，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。将试样于-18冷冻保存。7 7 分析分析步骤步骤 7.1 7.1 提取提取 称取 20g 试样（精确至 0.01g）于 80mL 离心管中，加入 40mL 乙腈，15000 r/min 匀浆提取 1min，加入 5g 氯化钠，再匀浆提取 1min，4200 r/min 离心 5min，取上清液 20mL（相当于 10g 试样量），40水浴旋转浓缩至 1mL 左右，待净化。7.27.2 净化净化 在 Sep-Pak CarbonNH2固相萃取柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，置于下接废液瓶的固相萃取装置上。加样前先用 4mL 乙腈-甲苯溶液预洗柱，当液面到达无水硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上中，并更换鸡心瓶接收。用 2mL 乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶，将洗涤液并入萃取柱中，重复此操作 3 次。将残留样液转移于萃取柱中。在固相萃取柱顶端连接 50mL 贮液器，用 25mL 乙腈-甲苯溶液洗脱农药及相关化学品，合并于 100mL 鸡心瓶中，40水浴旋转浓缩至 Sep-Pak CarbonNH2固相萃取柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效。GB 23200.122016 3 0.5mL 左右。于 45下氮气吹干，用 1mL 乙腈-水溶液溶解残渣，经 0.2m 微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱仪测定。同时取不含农药及相关化学品的食用菌样品，按7.1和7.2步骤制备样品空白提取液，用于配制基质混合标准工作溶液。7.3 7.3 测定测定 7.3.17.3.1 A A、B B、C C、D D、E E、F F 组组液相色谱液相色谱-串联质谱串联质谱参考参考条件条件 色谱柱：a)ZORBAX SB-C18，3.5 m，100 mm 2.1mm（内径）或相当者；b)流动相及梯度洗脱条件见表 1；表 1 流动相及梯度洗脱条件 步骤 总时间/min 流速/（L/min）流动相 A（0.1%甲酸水）/流动相 B（乙腈）/0 0.00 400 99.0 1.0 1 3.00 400 70.0 30.0 2 6.00 400 60.0 40.0 3 9.00 400 60.0 40.0 4 15.00 400 40.0 60.0 5 19.00 400 1.0 99.0 6 23.00 400 1.0 99.0 7 23.01 400 99.0 1.0 c)柱温：40；d)进样量：10 L；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：正模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0.28 MPa；i)离子喷雾电压：4000 V；j)干燥气温度：350；k)干燥气流速：10 L/min；l)监测离子对，碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B。7.3.2 G7.3.2 G 组液相色谱组液相色谱-串联质谱串联质谱参考参考条件条件 a）色谱柱：ZORBAX SB-C18，3.5 m，100 mm 2.1mm（内径）或相当者；b)流动相及梯度洗脱条件见表 2；表 2 流动相及梯度洗脱条件 步骤 总时间/min 流速/（L/min）流动相 A（5mmol/L 乙酸铵水）/流动相 B（乙腈）/0 0.00 400 99.0 1.0 1 3.00 400 70.0 30.0 2 6.00 400 60.0 40.0 3 9.00 400 60.0 40.0 4 15.00 400 40.0 60.0 5 19.00 400 1.0 99.0 6 23.00 400 1.0 99.0 7 23.01 400 99.0 1.0 c)柱温：40；d)进样量：10 L；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：负模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0.28 MPa；GB 23200.122016 4 i)离子喷雾电压：4000 V；j)干燥气温度：350；k)干燥气流速：10 L/min；l)监测离子对，碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B。7.3.37.3.3 定性测定定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度50，允许20偏差；相对丰度20至 50，允许25偏差；相对丰度10至20，允许30偏差；相对丰度10，允许50偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。7.3.4 7.3.4 定量测定定量测定 本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。440 种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图参见附录 C。7.47.4 平行试验平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。7.57.5 空白试验空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。8 8 结果计算结果计算和表述和表述 液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法