GB 23200.46-2016 食品安全国家标准 食品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的测定 气相色谱-质谱法.pdf

ICS 点击此处添加 ICS 号 点击此处添加中国标准文献分类号 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB GB 23200.462016 代替SN/T 16242009 食品安全国家标准 食品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的测定 气相色谱-质谱法 National food safety standards Determination of pyrimethanil,mepanipyrim,myclobutanil and azoxystrobin residues in foods Gas chromatography-mass spectrometry 2016-12-18 发布 2017-06-18 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 发布 国家食品药品监督管理总局 GB 23200.462016 I 前前 言言 本标准代替SN/T 1624-2009 进出口食品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的检测方法气相色谱质谱法。本标准与SN/T 1624-2009相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称中“进出口食品”改为“食品”；标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 1624-2009。GB 23200.462016 1 食品安全国家标准食品安全国家标准 食品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的食品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的测定测定 气相色谱气相色谱-质谱法质谱法 1 1 范围范围 本标准规定了试样的制备方法和保存条件以及粮谷、蔬菜、水果、坚果、茶叶、畜、禽、水产品、蜂产品中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量检验的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于大米、茄子、苹果、板栗、茶叶、牛肉、鸡肉、鱼、蜂蜜中嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯残留量的测定，其它食品可参照执行。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 原理原理 用丙酮或乙酸乙酯、丙酮和氯化钠水溶液提取试样中残留的嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯，经液液萃取和石墨化炭黑柱/氨基柱组合柱净化，用气相色谱-质谱仪选择离子检测，外标法定量。4 4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.14.1 试剂试剂 4.1.1 丙酮（C3H6O）：农残级。4.1.2 乙酸乙酯（C4H8O2)。4.1.3 乙腈（CH3CN）：HPLC 级。；4.1.4 甲苯（C7H8）。4.1.5 正己烷（C6H14）。4.1.6 氯化钠（NaCl）。4.1.7 无水硫酸钠（Na2SO4）：于 650 灼烧 4 h，储于密封容器中备用。4.24.2 溶液配制溶液配制 4.2.1 氯化钠溶液（300 g/L）：称取 300 g 氯化钠用蒸馏水溶解并定容至 1 000 mL。4.2.2 乙腈-甲苯（3+2，体积比）：取 30 mL 乙腈和 20 mL 甲苯，混合均匀。4.2.3 乙腈-甲苯（3+1，体积比）：取 30 mL 乙腈和 10 mL 甲苯，混合均匀。4.2.4 丙酮-正己烷（1+1，体积比）：取 50 mL 丙酮和 50 mL 正己烷，混合均匀。4.2.5 乙腈饱和正己烷。4.2.6 正己烷饱和乙腈。4.3 4.3 标准品标准品 4.3.1 嘧霉胺标准品：分子式,C12H13N3；CAS 53112-28-0；纯度99%。4.3.2 嘧菌胺标准品：分子式,C14H13N3；CAS 110235-47-7；纯度99%。4.3.3 腈菌唑标准品：分子式,C15H17ClN4；CAS 88671-89-0；纯度99%。4.3.4 嘧菌酯标准品：分子式,C22H17N3O5；CAS 131860-33-8；纯度99%。4.4 4.4 标准溶液配制标准溶液配制 GB 23200.462016 2 4.4.1 嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯标准溶液：准确称取适量的嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯标准品，用丙酮配制成100 g/mL标准储备液，5 以下贮存，6个月以内使用。再用丙酮稀释成适当浓度的标准工作溶液，5 以下贮存，3个月以内使用。4.5 4.5 材料材料 4.5.1 石墨化炭黑柱/氨基柱组合柱：500 mg，6 ml；或者 石墨化炭黑柱（500mg,6ml）与氨基柱（500mg,3ml）按照从上到下串联使用。4.5.2 无水硫酸钠柱：150 mm10 mm玻璃层析柱，从下往上依次装入脱脂棉，5 cm高的无水硫酸钠。5 5 仪器和设备仪器和设备 5.1 气相色谱-质谱联用仪，配电子轰击离子源（EI 源）。5.2 分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5.3 漩涡混合器。5.4 均质器。5.5 离心机：6 000 r/min。5.6 固相萃取装置。5.7 旋转蒸发器 5.8 氮气吹干仪。5.9 离心管:玻璃,50 mL。5.10 水平回旋式摇床。6 6 试样制试样制备与保存备与保存 6.1 6.1 试样制备试样制备 6.1.1 6.1.1 水果、蔬菜、坚果水果、蔬菜、坚果 取约500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。6.1.2 6.1.2 动物源性食品动物源性食品 6.1.2.1 肉类及水产品：取样品中有代表性的部分约 500 g，用粉碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。6.1.2.2 蜂蜜：取有代表性样品约500 g，未结晶样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过60 的水浴中，待样品全部溶化后搅匀，迅速冷却至室温。制备好的样品装入洁净容器内密封并做好标识。6.16.1.3 .3 粮谷、茶叶粮谷、茶叶 取样品约 500 g，用粉碎机粉碎至全部通过 20 目筛，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。注：以上样品取样部位按GB 2763附录A执行。6.2 6.2 试样保存试样保存 水果、蔬菜、坚果、畜、禽和水产品等试样于-18 以下冷冻保存；粮谷、茶叶、蜂产品等试样于室温避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 7 分析步骤分析步骤 7.1 7.1 提取提取 7.1.1 7.1.1 水果、蔬菜水果、蔬菜 称取搅碎混匀的试样约10 g(精确到0.01 g)于100 mL锥形瓶中，加25 mL丙酮和15 g氯化钠，在水平回旋式摇床上振摇30 min。过滤到250 mL分液漏斗中,用20 mL丙酮分两次洗涤锥形瓶及滤渣，合并滤液于分液漏斗中，加25 mL氯化钠溶液和30 mL乙酸乙酯于同一分液漏斗中，振摇2 min,静置分层，收集有机相。下层水相再用20 mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相,过无水硫酸钠柱至心形瓶中。于45 水浴上抽真空旋转蒸发至干。7.1.2 7.1.2 畜、禽、水产品畜、禽、水产品 称取搅碎混匀的试样约10 g(精确到0.01 g)于50 mL离心管中，加25 mL乙酸乙酯，15 g氯化钠，均质1 min,以4000 r/min离心5 min。取上层有机相过无水硫酸钠柱转入心形瓶。再每次用20 mL乙酸乙酯分两次按上述步骤提取残渣，合并有机相于心形瓶中。于45 水浴上抽真空旋转蒸发至干。GB 23200.462016 3 7.1.3 7.1.3 粮谷、茶叶、板栗粮谷、茶叶、板栗 称取搅碎混匀的试样约10 g(精确到0.01 g)于三角瓶中，加25 mL乙酸乙酯(板栗样品加5 g氯化钠)，在水平回旋式摇床上振摇30 min，过滤到250 mL分液漏斗中，用20 mL乙酸乙酯分两次洗涤锥形瓶及滤渣，合并滤液于同一分液漏斗中并加入30 mL氯化钠溶液，振荡1 min,液液萃取,静置分层，乙酸乙酯层经无水硫酸钠柱转入心型瓶中；水相再加入25 mL乙酸乙酯液液萃取，静置分层，弃去水相，合并乙酸乙酯层于上述同一心形瓶中。于45水浴上抽真空旋转蒸发至干。7.1.4 7.1.4 蜂蜜蜂蜜 称取10 g(精确到0.01 g)蜂蜜样品于三角瓶中，加入20 mL氯化钠溶液和5 mL丙酮溶解，在水平回旋式摇床上振摇30 min，转入250 mL分液漏斗中，再分别用30 mL氯化钠溶液分两次，50 mL乙酸乙酯分两次洗原三角瓶，均转入同一分液漏斗，振摇2 min，静置分层（如果发生乳化，可将上层及乳化层在4000 r/min离心5 min，取上层转入心型瓶），收集有机相到另一个分液漏斗。水相再用20 m乙酸乙酯提取两次，合并有机相到同一分液漏斗中，分液漏斗中加入40 mL氯化钠溶液振摇1 min，静置（如果发生乳化，可将上层及乳化层在4000r/min离心5 min），乙酸乙酯层过无水硫酸钠柱转入上述心形瓶，于45水浴上抽真空旋转蒸发至干。7.2 7.2 净化净化 7.2.1 7.2.1 畜、禽、水产品、粮谷、茶叶、板栗畜、禽、水产品、粮谷、茶叶、板栗 对 7.1.2 和 7.1.3 获得的试样残渣，加入 40 mL 乙腈饱和正己烷分两次溶解，转入同一 250 mL 分液漏斗中，分别用 50 mL 正己烷饱和乙腈分两次、乙腈饱和正己烷 10 mL 洗心型瓶，均转入上述分液漏斗中。振荡分层，乙腈层过无水硫酸钠柱转入原心型瓶，正己烷层每次再用正己烷饱和乙腈 15mL 洗两次，正己烷层弃去，乙腈层过无水硫酸钠柱合并入心型瓶，于 45水浴上抽真空旋转蒸发至干。7.2.2 7.2.2 石墨化炭黑柱石墨化炭黑柱/氨基柱组合柱净化氨基柱组合柱净化 用 1 mL 乙腈-甲苯（3+1，体积比）溶解 7.1.1、7.1.4、7.2.1 得到的试样残渣，全部转入石墨化炭黑柱-氨基柱。再用 1 mL 乙腈-甲苯（3+1，体积比）分两次洗心形瓶，并入上述石墨化炭黑柱-氨基柱，弃去全部流出液。用 10 mL 乙腈-甲苯（3+2，体积比）洗脱石墨化炭黑柱-氨基组合柱，接收全部洗脱液。于 45 水浴上氮气流吹干。用丙酮-正己烷（1+1，体积比）定容 1.0 mL。供气相色谱质谱分析。7.3 7.3 测定测定 7.3.1 7.3.1 气相色谱气相色谱-质谱参考条件质谱参考条件 7.3.1.1 7.3.1.1 色谱条件色谱条件 a)色谱柱：DB-5MS，30 m 0.25 mm(内径),0.25 m，或相当者；b)色谱柱升温程序：210（2 min）30/min 280 10/min 290(6 min)；c)进样口温度：250；d)载气：氦气，纯度 99.999%，e)载气流速：恒流模式 1 mL/min;f)进样方式：不分流；g)进样量：2 L；h)开阀时间：1 min。7.3.1.2 7.3.1.2 质谱条件质谱条件 a)接口温度：280；b)离子源：电子轰击源（EI）；c)电离电压：70eV；d)离子源温度：230；e）检测方式：SIM；f)溶剂延迟时间：2.5 min；g)选择离子及相对丰度：见表 1。表1 选择离子及相对丰度 被测组分 定量离子（相对丰度）/%定性离子（相对丰度）/%嘧霉胺 198(100)199(47)188(3)184(4)嘧菌胺 222(100)223(51)208(5)181(3)腈菌唑 179(100)150(53)245(14)288(13)GB 23200.462016 4 嘧菌酯 344(100)388(28)372(14)403(13)7.3.2 7.3.2 定量测定定量测定 对样液及标准工作液等体积参差进样测定。实际应用的标准工作液和待测样液中，嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯的响应值均应在仪器的线性范围之内。在上述气相色谱-质谱条件下，嘧霉胺、嘧菌胺、腈菌唑、嘧菌酯的保留时间分别为3.42 min、5.48 mi