GBT 16287-1996 食品中淀粉的测定方法 酶-比色法.pdf

G B/T 1 6 2 8 7-1 9 9 6前言 食品中淀粉测定方法，一般采用化学方法酸水解法。由于酸水解淀粉时，样品中的其他糖类被分解为还原糖(单搪)，造成淀粉的测定结果偏高。本标准采用酶一 比 色法是在检索了近2 0 年7 4 篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。要使食品中的淀粉含量测定准确，必须使淀粉完全溶解。本标准吸取了法国C u h e r.J.C 1 9 8 2 年总结的有效溶解方法，即二甲 基亚矾法，达到了使淀粉完全溶解的目的。淀粉酶解后的产物 葡萄糖的测定方法，与G B/T 1 6 2 8 5-1 9 9 6 保持一致。本标准的附录A是标准的附录。本标准由全国 食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:中国农垦北方食品监测中心。本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。本标准主要起草人:张宗城、刘宁、郝煌。中华 人 民 共 和 国 国家 标 准食 品 中 淀 粉 的 测 定 方 法 酶一 比色法G a/T 1 6 2 8 7 一 1 9 9 6F o r d e t e r mi n a t i o n o f s t a r c h i n f o o dE n z y m e-c o l o r i m e t r i c me t h o d1 范围本标准规定了用酶一 比色法测定食品中淀粉的方法。本标准适用于各类食品中淀粉的测定。本标准最低检出限量为0.0 9 fa g(淀粉)/m L(试液)。2 原理 淀粉在淀粉葡萄糖昔酶(A G S)催化下，最终水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(G O D)在有氧条件下，催化-D-葡萄糖(葡萄搪水溶液)氧化，生成D-葡萄糖酸-S 一 内醋和过氧化氢。受过氧化物酶(P O D)催化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色酿亚胺。在5 0 5 n m波长处测酿亚胺的吸光度，计算食品中淀粉的含量。(c 6H I。0 5)。+n H Zo A G S(C sH,oO,).+n H zO-n C,H u 0 6 c。H，:0 6+0 2 三 理 乳 二。H，。aC 61-1,20 6+0 2 6H,oO,+H 20 Z H,0 z+C 6H sO H+CH,3N 60 坚 坦 C 6 H 5N O+H zO3 试荆I1 组合试剂盒 1 号瓶:内 含淀粉葡萄糖昔酶(a m y l o g l u c o s i d a s e)2 0 0 U(活力单位)、柠檬酸、柠橄酸三钠;2 号瓶:内含 0.2 m o l/L磷酸盐缓冲液(p H=7.0)2 0 0 m L，其中含 4-氨基安替比林为0.0 0 1 5 4 m o l/L;3 号瓶:内 含0.0 2 2 m o l/L 苯酚溶液2 0 0 m L;4 号瓶:内含葡萄糖氧化酶(g l u c o s e o x id a s e)8 0 0 U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，p e r o x id a s e)2 0 0 0 U(活力单位)。1,2,3,4 号瓶须在4 左右保存。3.2 酶试剂溶液3.2.1 将1 号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为“m L.轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解。此溶液即 为淀粉葡萄糖普酶 试剂溶液.其中 柠徽酸(缓冲 溶液)浓度为0.1 m o l/L,p H=4.6。在4 C左右保存，有效期1 个月。3.2.2 将 2 号瓶与 3 号瓶中的溶液充分混合。3.2.3 将4 号瓶中的酶溶解在3.2.2 混合液中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，即葡萄糖氧化国家技术监奋局1 9 9 6 一 0 4 一 1 0 批准1 9 9 6 门2 一 0 1 实施G B/T 1 6 2 8 7-1 9 9 6酶一 过氧化物酶试剂溶液。在4 C 左右保存，有效期 1 个月。3.3 二甲基亚矾(分析纯)。3.4 6 m o l/I 盐酸溶液 将 2 m o l/I 盐酸(G B 6 2 2，分析纯)与等体积重蒸馏水混合，摇匀。3.5 6 m o l/I氢氧化钠溶液 称取2 4 g 氢氧化钠(G B 6 2 9，分析纯)，溶于1 0 0 0 m l 重蒸馏水中，摇匀。I6 淀粉标准溶液 称取经1 0。士2 C 干燥2 h 的可溶性淀粉(H G B-3 0 9 5，分析纯)0.2 0 0 0 g,溶于少量6 0 重蒸馏水中，冷却后定容至1 0 0 m 1 _,摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V l o.o o-I o o,即2 0 0 p g/m L淀粉标准溶液。4 仪器和设备 实验室常规仪器及下列各项:4 门研钵或粉碎机。4?2 分 析 筛。4.3 组织捣碎机4.4 恒温水浴锅。4.5 可见光分光光度计。4.6 酸度计或p H计。4.7 微量移液管:1.0 0 m L,精度0.0 1 m L,5 试样的制备5.1 固体样品 粉末状样品:取有代表性的样品至少2 0 0 g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。颗粒状样品:取有代表性的样品至少2 0 0 g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过1 0 0目 分析筛，置于密闭的玻璃容器内。5.2 糊状样品 取有代表性的样品至少2 0 0 9，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。5.3 固液体样品 取有代表性的样品至少2 0 0 g,用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。5.4 液体样品 取有代表性的样品至少2 0 0 g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。6 试液的制备 用1 0 0 m L 三角瓶称取试样(5.1-5-4)0.2-2 g(精确至。.0 0 0 1 g)，加入2 0 m L 二甲 基亚矾(3-3)和6 M O O 盐酸溶液(3.4)5 m L，于6 0 士1 水浴锅中加热3 0 m i n(每隔5 m i n 摇动一次)。冷却至室温后，用6 m o l/L氢氧化钠溶液(3.5)和酸度计调整p H值至4.6 左右。将溶液转移到2 5 0 m L容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度，摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液3 0 m L，即为试液。试液中淀粉含量高于1 0 0 0 p g/m L时，可以适当增加定容体积。了 分析步骤7.1 标准曲线的绘制 用微量移液管吸取。.0 0,0.2 0,0.4 0,0.6 0,0.8 0,1.0 0 m L淀粉标准溶液(3-6)，分别置于 1 0 m L比色管中，各加入 1 m l淀粉葡萄糖昔酶试剂溶液(3.2.1)，摇匀，干5 8 士2 C 水浴锅中恒温2 0 m i n。冷却至G B I T 1 6 2 8 7-1 9 9 6室温，加入3 m l葡萄糖氧化酶一 过氧化物酶试剂溶液(3.2.3).摇匀，在3 6 士1 C 水浴锅中恒温4 0 m i n,冷却至室温，用重蒸馏水定容至1 0 m L，摇匀。用1 c m比色皿，以淀粉标准溶液含量为。的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长5 0 5 n。处测定各比 色管中溶液的吸光度 以淀粉含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。7.2 试液吸光度的测定 用 微 量 移 液 管 吸 取。.2 0-2.0 0 m L 试 液(6)(依 试 液 中 淀 粉 的 含 量 而 定)，置 于1 0 m L 比 幽 中以下按7.1 步骤操作;但须用等量试液(的调整分光光度计的零点。测出 试液吸光度后，在标准曲 线上查出对应的淀粉含A t.8 分析结果的表述 食品中淀粉的含量以质量百分率表示，按式(1)计算:C人一.-丁二关 v,m X 石 广 v1 11 0 0 0 又 1 0 0 0义 1 0 0C V_ _m X-X lo U U U vi(1)式中:X 样品中淀粉的含量，质量百分率,:C 一 一标准曲 线上查出的 试液中淀粉含量,k g:m 试样的质量，9;V 试液的定容体积，m L t V,测定时吸取试液的体积:m L,计算结果精确至小数点后第二位。9 允许差 同一样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的5.0%,G B/T 1 6 2 8 7-1 9 9 6 附录A (标准的附录)淀粉葡萄枪昔酶、葡萄枪叙化酶、过级化物酶的技术要求、试验方法及判定规则技术要求 月.内.1AAA 1.2酶活力淀粉 葡萄 糖昔酶 酶活力(U/m g):2;葡萄糖氧化酶酶活力(U/m g):2 0;过氧化物酶酶活力(U/m g):5 0 0干扰酶 淀粉葡萄糖昔酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶.R 果糖昔酶、半乳糖昔酶和过氧化氢酶。A 2 试验方法 用微量移液管吸取。.5 0 m L 淀粉标准溶液(3-6),置于1 0 m L比 色管中，加入1 0 0 g 乳糖(H G 3-1 0 0 0，分析纯),1 0 0 p g 蔗糖(H G 3-1 0 0 1，分析纯)和1 0 0 J g 纤维二糖(生化纯)，再加入1 m L淀粉葡萄昔酶试剂溶液(3.2.1)，以下按7.1 步骤操作。测定吸光度后，在标准曲线(7.1)上查出对应的淀粉含量，按式(A l)计算淀粉的回收率:_C找=:气，丁 丫不 二 叹入iuu U.b X zuv。.(Al)式中:R一 淀粉的回 收率，%;C一 一淀粉的实测值，1 g=A 3 判定规则 测得淀粉的回收率，如在9 5%-1 0 5%范围内，则判定淀粉葡萄糖昔酶、葡萄糖氧化酶和过氧化物酶符合技术要求。G B/T 1 6 2 8 7-1 9 9 6 食品中淀粉的测定方法酶一比色法 第 1 号修改单本修改单经国家技术监督局于 1 9 9 7 年9 月1 1日以技监国标函(1 9 9 7)第2 0 0 号文批准，自1 9 9 8 年1 月1 日 起实施 1.3.5 条第 2 行中的“溶于 1 0 0 0.1 重燕馏水中”更改为“溶于 1 0 0 m 1 重蒸馏水中”2.7.2 条改用新条文:“7.2 试液吸光度的测定 用微量移液管取 0.2 0 -2.0 0 m i(依试液中淀粉的含量而定)试液(6).置于 1 0-1 比色管中。以下按 7.1 步骤操作 但须用等量试液(6)调整分光光度计零点，操作步驶如下。取等量试液(6)加人 3.1 葡萄糖氧化酶一 过氧化物酶试剂溶液(3.2.3).摇匀.在 3 6 士1 C水浴锅中恒温 4 0 m;.。冷却至室温，用重蒸馏水定容至 1 0 m 1。用此溶液调整分光光度计零点 侧出试液吸光度后，在标准曲线 上查出对应的淀粉含量。”刊载十 1 9 9 8 年第 1 期 中国标准化