GBT 14926.59-2001 实验动物 犬瘟热病毒检测方法.pdf

I Cs 6 5.0 2 0.3 0B 4 4署8中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 4 9 2 61 8-1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1G B/T 1 4 9 2 6.5 6-1 4 9 2 6.6 4-2 0 0 1实验动物微生物学检测方法(4 L a b o r a t o r y a n i m a l-Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n me t h o d s2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施中华人民共和匡国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 婿GB/T 1 4 9 2 61 8-1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1G B/T 1 4 9 2 6-5 6-1 4 9 2 6-6 4-2 0 0 1目录G B/T 1 4 9 2 6.1 8-2 0 0 1 实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法.1G B/T 1 4 9 2 6.1 9-2 0 0 1 实验动物汉坦病毒检测方法.4G B/T 1 4 9 2 6.2 0-2 0 0 1 实验动物鼠痘病毒检测方法 7G B/T 1 4 9 2 6.2 1 -2 0 0 1 实验动物兔出血症病毒检测方法 .1 0G B/T 1 4 9 2 6.2 2-2 0 0 1 实验动物小鼠肝炎病毒检测方法 .1 3G B/T 1 4 9 2 6.2 3-2 0 0 1 实验动物仙台病毒检测方法 .1 6GB/T 1 4 9 2 6.2 4-2 0 0 1实验动物小 鼠肺炎病 毒检测方法.1 9G B/T 1 4 9 2 6.2 5-2 0 0 1 实验动物呼肠孤病毒 m型检测方法 .2 2G B/T 1 4 9 2 6.2 6-2 0 0 1 实验动物小鼠脑脊髓炎病毒检测方法 .2 5G B/T 1 4 9 2 6.2 7-2 0 0 1 实验动物小鼠腺病毒检测方法 .2 8G B/T 1 4 9 2 6.2 8-2 0 0 1 实验动物小鼠细小病毒检测方法 .3 1G B/T 1 4 9 2 6.2 9-2 0 0 1 实验动物多瘤病毒检测方法 .3 4GB/T 1 4 9 2 6.3 0-2 0 0 1 实验动物兔轮状病毒检测方法 .3 7GB/T 1 4 9 2 6.3 1-2 0 0 1 实验动物大鼠细小病毒(K R V和H-1 株)检测方法.4 0GB/T 1 4 9 2 6.3 2-2 0 0 1 实验动物大鼠冠状病毒/延泪腺炎病毒检测方法.4 3GB/T 1 4 9 2 6.5 6-2 0 0 1 实验动物狂犬病病毒检测方法 .4 6GB/T 1 4 9 2 6.5 7-2 0 0 1 实验动物犬细小病毒检测方法 .4 9GB/T 1 4 9 2 6.5 8-2 0 0 1 实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法 .5 2GB/T 1 4 9 2 6.5 9-2 0 0 1 实验动物犬瘟热病毒检测方法 .5 5GB/T 1 4 9 2 6.6 0-2 0 0 1 实验动物琳猴疙疹病毒 1 型(B病毒)检测方法 5 8GB/T 1 4 9 2 6.6 1-2 0 0 1 实验动物猴逆转D型病毒检测方法 6 1GB/T 1 4 9 2 6.6 2-2 0 0 1 实验动物猴免疫缺陷病毒检测方法 .6 4G B/T 1 4 9 2 6.6 3-2 0 0 1 实验动物猴T淋巴细胞趋向性病毒 I 型检测方法.6 7GB/T 1 4 9 2 6.6 4-2 0 0 1实验动物猴痘病毒检测方法.7 0G s/T 1 4 9 2 6-5 9-2 0 0 1前言 本标准规定了犬瘟热病毒的检测方法。犬瘟热是犬的主要烈性传染病之一，在我国犬群中广泛流行，是目前危害我国养犬业最为严重的疾病，是普通级犬和S P F犬的必检项目。因此增加该病毒的检测方法。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:田克恭。中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 实验动物犬瘟热病毒检测方法GB/T 1 4 9 2 6.5 9-2 0 0 1La b o r a t o r y a n i ma l-Me t h o d f o r e x a mi n a t i o n o f c a n i n e d i s t e mp e r v i r u s(CDV)范围本标准规定了犬瘟热病毒(C D V)的检测方法、试剂等。本标准适用于犬C D V的检测。2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 1 4 9 2 6.5 0-2 0 0 1 实验动物 酶联免疫吸附试验 G B/T 1 4 9 2 6.5 1-2 0 0 1 实验动物免疫酶试验原理根据免疫学原理，采用 C D V抗原检测犬血清中C D V抗体。主 要试荆 和器材4.1 试 剂4.1.1 E L I S A抗原4.1.1.1 特异性抗原 用C D V感染 V e r o细胞，接种8 -1 0 d后，当病变达+时收获。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成E L I S A抗原。4.1.1.2 正常抗原 Ve r。细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。4.1.2抗原片 C D V接种V e r。细胞，接种后5-7 d，病变达+一十+时，用胰酶消化分散，P B S 洗涤，涂片。室温干燥的同时，在紫外线下 2 0 c m处照射 3 0 mi n，冷丙酮固定 1 0 m i n,-2 0 保存。4.1.3 阳性血清 C D V实验感染或 自然感染的犬血清。4-1-4 阴性血清 无C D V感染、未经免疫的犬血清。4.1.5 酶结合物中华人民共和国国家质t监督检验检疫总局2 0 0 1-0 8-2 9 批准2 0 0 2-0 5-0 1实施 5 6GB/T 1 4 9 2 6.5 9-2 0 0 1辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬 I g G抗体;或辣根过氧化物酶标记葡萄球菌 A蛋白(S P A).器材1 酶标仪。2 普通显微镜。3 3 7 培养箱或水浴箱。检测方法4.242424255.1 采用E L I S A方法(见 G B/T 1 4 9 2 6.5 0-2 0 0 1)进行血清学检测。5.2 采用I E A方法(见GB/T 1 4 9 2 6.5 1-2 0 0 1)进行血清学检测。6 结 果判定6.1 普通级犬，接种疫苗后，经 E L I S A检测抗体效价)I:1 6 0，或 I E A检测抗体效价)1:2 0 判为合格。6.2 S P F级犬，不应进行疫苗接种，对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性 口结果报告根据判定结果，作出报告。