农业农村部公告第316号-7-2020 饲料中赛地卡霉素的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS65.120B46中华人民共和国国家标准农业农村部公告第316号一7一2020饲料中赛地卡霉素的测定液相色谱-串联质谱法Determination of sedecamycin in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry2020-07-17发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布农业农村部公告第316号一7一2020全国农业食品公服分本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量与标准检测技术研究所、北京大北农科技集团股份有限公司。本标准主要起草人：陈刚、王安如、贾曼、朱丹、李强强、王凯强。农业农村部公告第316号一7一2020饲料中赛地卡霉素的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了饲料中赛地卡霉素的液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中赛地卡霉素的测定。本标准检出限为0.03mg/kg,定量限为0.1mgkg2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的P凡是B引期的只用文件，仅然日期的版本适用于本文件。分析红给尝和响有的修改里】坦文件GB/T6682分析实验室用水舰格和试验方GB/T20195动物饲料3原理试样中的赛地卡每卷粉乙提取，固相萃取柱净化后国液相色谱戦历谱测定，基质匹配曲线校准，外标法定量。4试剂或材料三EAR除非另有规定用分析纯试剂4.1水：GB/个6682，4.2乙腈：色谱纠工4.3甲酸：色谱纯4.40.1%甲酸溶液潘确移取1m中酸，用水稀并定容至1000m4.5正己烷（乙饱0m正婉中人0乙(4,2，无分混分层后取上层正己烷使用。4.6赛地卡莓素标准储5 mg/L,准确桥取赛地卡得秦标雅品C37:23477-98-7,纯度不低于99%)50mg(精确至0.0g,用腈(42)溶解并定容至10mL.20以下避光保存，有效期为3个月。4.7赛地卡霉素标准中间溶液】(100gm):准确移取赛地卡霉素标准储备溶液0.1mL,用乙腈(4.2)定容至5mL,摇匀。一20以下避光保存有效期1个月。4.8赛地卡霉素标准中间溶液（gm:准确移取赛地卡霉素标准中间溶液I(4.7)0.05mL,用乙腈(4.2)定容至5mL,摇匀。28避光保存，临用现配。4.9赛地卡霉素标准系列工作溶液：准确移取赛地卡霉素标准中间溶液I(4.7)或赛地卡霉素标准中间溶液(4.8)适量，用乙腈(4.2)配制成赛地卡霉素浓度分别为0.1g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL、5.0g/mL、10.0g/mL、100.0g/mL的标准系列溶液，28避光保存。临用现配。4.10硅胶固相萃取柱(SI):500mg/3mL,或性能相当者。4.11微孔滤膜：0.22um,有机系。5仪器设备5.1液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。1农业农村部公告第316号一7一20205.3涡旋混合器。5.4振荡器。5.5高速离心机：转速不低于10000r/min。5.6固相萃取装置。5.7氮吹仪。5.8超声波清洗器。6样品按GB/T20195制备样品，至少200g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中，备用。选取与待测样品类型相同、均匀一致且在待测物保留时间处仪器响应值小于方法定量限30%的饲料样品，作为空白样品。7试验步骤7.1提取平行做2份试验。称取试样5g(精确至0.01g),置于50mL离心管中，准确加入15mL乙腈(4.2)，涡旋混匀，振荡提取l0min,超声提取5min,于10000r/min离心l0min,转移上清液至另一离心管中。再向残渣中准确加入10mL乙腈(4.2)重复提取一次，合并提取液，混匀备用。7.2净化硅胶固相萃取柱(4.10)用3mL乙腈(4.2)活化。准确移取备用液(7.1)过柱。配合饲料移取备用液5mL过柱，浓缩饲料、精料补充料及添加剂预混合饲料分别移取备用液0.5mL过柱，收集流出液于离心管中。用3mL乙腈(4.2)洗脱，收集合并洗脱液于离心管中，于40下氮气吹干。准确移取1mL乙腈(4.2)涡旋溶解残渣，再加入正己烷(4.5)0.5mL,涡旋1min。10000r/min离心10min,弃去上层正己烷，乙腈相经0.22m滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3基质匹配标准系列溶液的制备取空白试样，按7.1和7.2处理，得到空白基质溶液，分别准确移取赛地卡霉素标准系列工作溶液(4.9)0.1mL,于40下氮气吹千，用1mL空白基质溶液进行复溶，配制成10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL基质匹配标准系列工作溶液。7.4测定7.4.1液相色谱参考条件色谱柱：C1s柱，柱长150mm,内径2.1mm,粒径5um,或性能相当者。柱温：30。进样量：5L。流速：300L/min。流动相：A为0.1%甲酸溶液(4.4)，B为乙腈(4.2)，梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间，minA,%B,%0.0060401.5060402.5010905.0010905.01604010.0060407.4.2质谱参考条件离子源：电喷雾离子源。2农业农村部公告第316号一7一2020扫描方式：正离子模式(ESI+)。监测方式：多反应监测(MRM)。鞘气压力(GS1):60psi。辅助气压力(GS2):45psi。碰撞气压力(collision gas):5psi。卷帘气压力(curtain gas):25psi。正离子模式电喷雾电压(1S):5500V。雾化温度：550。多反应监测(MRM)离子对、碰撞能量见表2。表2赛地卡霉素的多反应监测(MRM)离子对、碰撞能量的参考值被测物名称监测离子对，m/碰撞能量，eV502.3107.343赛地卡霉素502.3124.433。为定量离子。7.4.3基质匹配标准系列工作溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取基质匹配标准系列溶液(7.3)和试样溶液(7.2)上机测定。赛地卡霉素标准溶液定量离子色谱图参见附录A。7.4.4定性在相同试验条件下，试样溶液与基质匹配标准系列工作溶液中待测物的保留时间相对偏差应在士2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中待测物定性离子的相对离子丰度与浓度接近的基质匹配标准系列工作溶液中对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度502050102010最大允许偏差士2025士30507.4.5定量以赛地卡霉素基质匹配标准系列溶液(7.3)的浓度为横坐标、以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与基质匹配标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出线性范围，应重新试验。8试验数据处理试样中赛地卡霉素的含量心以质量分数计，单位为微克每千克(g/kg)。单点校准按式(1)计算，多点校准按式(2)计算。w=AXe.XV:XV:X1000(1)A.mV21000式中：A一试样溶液中赛地卡霉素的色谱峰面积；A。一基质匹配标准工作溶液中赛地卡霉素的峰面积；Ps基质匹配标准工作溶液中赛地卡霉素的质量浓度，单位为纳克每毫升(g/L):V1一试样提取溶液的体积，单位为毫升(mL):V2净化时所用试样溶液的体积，单位为毫升(mL):V3一氮气吹干后复溶液的体积，单位为毫升(mL);3