农业农村部公告第316号-5-2020 饲料中17种头孢菌素类药物的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS65.120B46中华人民共和国国家标准农业农村部公告第316号一5一2020饲料中17种头孢菌素类药物的测定液相色谱-串联质谱法Determination of 17cephalosporins in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry2020-07-17发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布农业农村部公告第316号一5一2020刘前共服食本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承细识别这些专利的责任。本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/T76)归口。本标准起草单位：农业农村部农产品质量安全监督检验测试中心（宁波）、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：吴银良、宋荣、朱勇、付岩、索德成、赵健、赵根龙、陈国、许秀琴、王全胜、张亮、张艳。I农业农村部公告第316号一5一2020饲料中17种头孢菌素类药物的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了饲料中头孢曲松、头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、头孢洛宁、头孢喹肟、头孢噻肟、头孢噻呋、头孢噻吩、头孢羟氨苄、头孢呋辛、头孢他定、头孢克洛和头孢丙烯的液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂顶混合饲料中17种头孢菌素类药物的测定。本标准头孢唑林，头孢哌酮、头孢乙腈头孢程肤显是呀孢呋辛和头抱他定检出限为100gkg,定量限为250g/kg:头泡曲松大孢朵孢拉定去/个头孢噻肟、头孢噻呋、头孢羟氨视驰性引用文丝0kg定量限为1002规范性引用文件用是必不少的。凡是淮日期的用文件，仅注国期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文其最新版本（包括所有的修政单）本文件。GB/T6682析实险室用水规格和试轮方法GB/T20195动均饲试样的制箱3原理Y3试样经乙特溶液强取甲酸溶液稀释后用液相色谱中联质谱仪检测、基质匹配标准溶液校准，外标法定多是湖4试剂或材料4.1水：GB/T6682,k4.2甲酸：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5氨水：色谱纯，25%。4.6乙酸铵：色谱纯。4.730%乙腈溶液：取300mL乙腈(43)与700mt水混匀。4.840%乙腈溶液：取400mL乙腈(4.3)与600mL水混匀。4.90.1%甲酸溶液：取甲酸1mL,用水稀释至1000mL,混匀。4.100.05mol/L乙酸铵溶液：称取3.85g乙酸铵(4.6)，加适量水溶解，再加人20mL氨水(4.5)和2mL甲酸(4.2)，混匀后用水定容至1000mL。4.11标准品：头孢曲松(Ceftriaxone,CIs H18 Ns O,S,CAS号：73384-59-5)、头孢氨苄(Cefalexin,C16HzN3O,S,CAS号：15686-71-2)、头孢拉定(Cefradine,C1sHgN3O4S,CAS号：38821-53-3)、头孢唑林(Cefazolin,C,H:NsO,S3,CAS号：27164-46-1)、头孢乙腈(Cefacetrile,C13 H1a N3 O6 S,CAS号：l0206-210)、头孢匹林(Cefapirin,CzH1zN3OsS2,CAS号：21593-23-7)、头孢洛宁(Cefalonium,C2oH1sN4OsS2,CAS号：5575-21-3)、头孢噻呋(Ceftiofur,CgH1zNO,Sa,CAS号：80370-57-6)、头孢噻吩(Cefalothin,C16H6N2OsS2,CAS号：153-61-7)、头孢呋辛(Cefuroxime,C6H1sN4OsS,CAS号：55268-75-2)、头孢他定1农业农村部公告第316号一5一2020(Ceftazidime,C2H2zN6O,Sz,CAS号：72558-82-8)、头孢丙烯(Cefprozil,.C1sHNO5S,CAS号：92665-29-7),纯度均不低于95%。头孢哌酮(Cefoperazone,C2sH2,NOsS2,CAS号：62893-19-0)、头孢喹肟(Cefquinome,C2sH24 Ne Os S2,CAS号：84957-30-2)、头孢噻肟(Cefotaxime,C6H,NsO,Sz,CAS号：63527-52-6)、头孢羟氨苄(Cefadroxil,C6HzN3O5S,CAS号：50370-12-2)、头孢克洛(Cefaclor,C1sH1CN3O,S,CAS号：53994-73-3)，纯度均不低于92%。注：标准品可含结品水或为相应的盐。4.12标准储备溶液(500g/mL):称取适量标准品（精确至0.01mg)(4.11),分别置于20mL容量瓶中，用30%乙腈溶液(4.7)溶解并定容。于一18以下保存，有效期为1个月。如所用标准品为相应的盐或含结晶水，应折算成有效成分。4.13混合标准中间溶液(25ug/mL):分别准确移取标准储备溶液(4.12)各1.0mL,于20mL容量瓶中，用30%乙腈溶液(4.7)定容。于一18以下保存，有效期为7d。4.14混合标准系列工作溶液：准确移取适量混合标准中间溶液(4.13)，用0.1%甲酸溶液(4.9)稀释定容配成混合标准系列工作溶液，浓度分别为0.625g/L、3.125g/L、6.25g/L、25g/L、125g/L、250g/L和625ug/L。临用现配4.15微孔滤膜：0.22m,水系。5仪器设备5.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源。5.2离心机：转速不低于9500r/min。5.3分析天平：感量0.01mg和0.01g。5.4振荡器。5.5涡旋混合器5.6塑料离心管：50mL。6样品按GB/T20195制备样品，至少200g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中，保存，备用。选取类型相同、均匀一致且在待测物保留时间处仪器响应值小于方法定量限30%的饲料样品，作为空白样品。7试验步骤7.1试样溶液的制备平行做2份试验。称取试样5g,精确至0.01g,置于50mL离心管中，准确加入40%乙腈溶液(4.8)25mL,振荡提取30min,于9500r/min离心5min,取出上清液，残渣用40%乙腈溶液(4.8)25mL重复提取一次，合并上清液。准确吸取0.2mL上清液，与0.8mL0.1%甲酸溶液(4.9)，混合均匀，用0.22m微孔滤膜(4.15)过滤备用。7.2基质匹配标准系列溶液的制备取空白试样，按7.1处理得到空白基质溶液。准确吸取0.2mL上清液，与0.8mL混合标准系列工作溶液(4.14)，混合均匀，配制成浓度为0.5g/L、2.5g/L、5.0g/L、20g/L、100g/L、200g/L和500g/L的基质匹配标准系列溶液，用0.22m微孔滤膜(4.15)过滤备用。临用现配。7.3测定7.3.1液相色谱参考条件色谱柱：Cs柱，柱长100mm,内径2.1mm,粒度1.7m;或性能相当者。柱温：35。进样量：10L。2农业农村部公告第316号一5一2020头孢曲松分析梯度洗脱程序见表1，其他头孢菌素类药物分析梯度洗脱程序见表2。表1头孢曲松分析梯度洗脱程序时间，min流速，mL/min0.05mol/L乙酸铵溶液，%甲醇，%00.3951.00.395心2.50.330703.50.330703.60.3955.00.3955表2其他头孢菌素类药物分析梯度洗脱程序时间，min流速，mL/min0.1%甲酸溶液，%甲醇，%00.39551.00.39554.50.350507.50.330707.60.39559.00.39557.3.2质谱参考条件电离方式：电喷雾电离，正离子模式(ES+)。检测方式：多反应监测(MRM)。毛细管电压：2.5kV。离子源温度：150。脱溶剂温度：500。脱溶剂气：氮气1000L/h。多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量见表3。表317种头孢菌素类药物的多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量的参考值被测物名称监测离子对，m/:锥孔电压，V碰撞能量，eV554.9/166.710头孢曲松26554.9/395.91012347.9/105.716头孢氨苄20347.9/157.76350.0/157.7168头孢拉定350.0/175.81610361.9/177.7812头孢乙腈361.9/257.88455.0/156.016头孢唑林455.0/323.0410646.0/530.0810头孢哌酮646.0/142.834423.9/151.71020头孢匹林423.9/291.81014459.0/122.7410头孢洛宁459.0/151.716529.0/124.7头孢喹肟662529.0/133.7614456.0/166.7头孢噻肟618456.0/124.96443