农业部1629号公告-2-2011 饲料中利血平的测定 高效液相色谱法.pdf

农业部1629号公告一2一2011前言本标准遵照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/T76)归口。本标淮起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都）。本标准主要起草人：李云、赵立军、柏凡、王艳、林顺全。I农业部1629号公告一2一20115仪器和设备5.1实验室用样品粉碎机。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3离心机：转速为5000r/min以上。5.4超纯水器5.5超声波清洗器。5.6涡旋混合器。5.7振荡器。5.8密封盖塑料离心管：50mL。5.9固相萃取装置。5.10高效液相色谱仪：配备荧光检测器。5.11氮吹仪。6试样的制备按GB/T14699.1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g,粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取7.1.1准确称取配合饲料样品4g(精确到0.01g),置于离心管(5.8)中，向试料中加入提取液(4.12)20.0mL,涡旋振荡2min。然后，将离心管(5.8)置于振荡器(5.7)上振荡10min,离心机(5.3)上以5000r/min离心5min,上清液待用。7.1.2准确称取添加剂预混合饲料或浓缩饲料样品1g2g(精确到0.01g),置于离心管(5.8)中，向试料中加入提取液(4.12)40.0mL,涡旋振荡2min。然后，将离心管(5.8)置于振荡器(5.7)上振荡10min,离心机(5.3)上以5000r/min离心5min,上清液待用。7.2SPE柱净化依次用3mL甲醇(4.2)、3mL水活化PX小柱(4.13)，精确收取提取液2.0ml过此小柱（流速1.0mL/min)。再依次用3ml水和3ml甲醇(4.2)淋洗，抽近干后用氨化乙腈(4.11)5ml洗脱，收集洗脱液于10mL试管内，在50水浴中氮气吹干，残余物用1.00ml.乙腈(4.4)定容，涡旋混合1min,过0.45m滤膜作为试样制备液，供高效液相色谱测定。7.3高效液相色谱条件检测波长：激发波长为280nm,发射波长为360nm。色谱柱：C1s柱，5m,250mm4.6mm:或性能类似的色谱柱。流动相：乙酸铵缓冲液+乙腈-6040(V!V)。流速：1.0mL/min。柱温：25.进样量：20L。7.4高效液相色谱测定取适量试样制备液(7.2)和相应浓度的标准工作溶液(4.10)，作单点或多点校淮，以色谱峰面积积分值定量。10.0g/mL利血平标准液相色谱图参见附录A。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分2