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农业部2630号公告-10-2017
转基因植物及其产品成分检测
耐除草剂玉米C0010.3.7及其衍生品种定性PCR方法
农业部
2630
公告
10
2017
转基因
植物
及其
产品
成分
检测
农业部2630号公告一10-2017转基因植物及其产品成分检测耐除草剂玉米C0010.3.7及其衍生品种定性PCR方法1范围本标准规定了转基因耐除草剂玉米C0010.37转化体特异性普通PCR检测方法。本标准适用于转基因耐除草剂玉米C0010.3.7及其衍生品种,以及制品中C0010.3.7转化体成分的定性PCR检测。2规范性引用文件RD下列文件对于本文件的应用是必不Snt本件。凡是不注日期的引用文件新版(包括所有的修改单)是用于区件GB/T6682分析实验室用水规格式验方法农业部1485号公告G10转基植物及其产品成分检测DNA提职和纯化农业部1861号公告02012转基因植物及其产品成分,于米内标酵闲定性PCR方法农业部2031号公告2013转基因植物及其产品成分检抽样mNY/T 672转基因物及其产通用要3术语和定义刀农业部1861号公2012界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1工C0010.3.7转化体特异性序列event-specific sequenceC0010.3.C0010.3.7外源插才片段3端与玉米基因组的连接区方列,包括化载体4部分序列与玉米基因组部分序列!4原理(3N根据转基因耐除草剂玉XC0010,3.7转化体特异性序列设计特异性写对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA片段,判断样品中是否含有C0010,3.7转化体戎分5试剂和材料除非另有说明,仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T5682规定的二级水。5.1琼脂糖。5.210g/L溴化乙锭(EB)溶液:称取1.0g溴化乙锭,溶解于100mL水中,避光保存。警告溴化乙锭有致癌作用,配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。注:根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。5.310mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液:在160mL水中加入80.0g氢氧化钠,溶解后,冷却至室温,再加水定容到200mL。5.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠,加入70mL水中,缓慢滴加氢氧化钠溶液(5.3)直至EDTA-Na2完全溶解,用氢氧化钠溶液(5.3)调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121)条件下灭菌20min.