农业部2630号公告-4-2017 转基因植物及其产品成分检测 抗虫玉米5307及其衍生品种定性PCR方法.pdf

ICS65.020.01B04中华人民共和国国家标准农业部2630号公告一4一2017转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米5307及其衍生品种定性PCR方法Detection of genetically modified plants and derived products-Qualitative PCR method for insect-resistant maize 5307and its derivates2017-12-25发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布农业部2630号公告一4一2017转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米5307及其衍生品种定性PCR方法1范围本标准规定了转基因抗虫玉米5307转化体特异性普通PCR检测方法。本标准适用于转基因抗虫玉米307及其衍生品种，以及制品中5307转化体成分的定性PCR检测。2规范性引用文件g的RD下列文件对于本文件的应用是件。凡是不注日期的引用文其最版木（包括所有的修改通用文件GB/T668?分析实益室用水规洛和试验方法农业部145号笑2010因植物及其产品成分检侧和纯化农业部1861号2012因植物及其产品成检玉之基因定性PCR方法农业部2031号公192013基因植物及其产品成抽NY/T672转梦因植物及其产品检通用要求3术语和定义EAR农业部18622012界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1工5307转化体特异性序列event-specific sequence of3075307外源插人片目3端与玉米基因组的连接区序列包括转化浅体TDNY部分序列与玉米基因组部分序列。4原理正根据转基因抗虫玉采307转化体特异性序列设计特异性引物，对试并行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA片段，判断样品中是否含有5307转化体成分。5试剂和材料除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的二级水。5.1琼脂糖。5.210g/L溴化乙锭(EB)溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。警告一溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。5.310mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。5.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加人70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(5.3)直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液(5.3)调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa(121)条件下灭菌20min。1