GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定.pdf

书 书 书?犌犅?犃、犇、犈?书 书 书犌犅 前言本标准代替 食品中维生素和维生素的测定、食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素、的测定、肉与肉制品维生素含量测定、肉与肉制品维生素含量测定、食用植物油中维生素组分和含量的测定高效液相色谱法。本标准与 相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中维生素、的测定”；增加了“食品中维生素的测定正相高效液相色谱法”；增加了“食品中维生素的测定液相色谱串联质谱法”；增加了“食品中维生素的测定高效液相色谱法”；修改了“食品中维生素和维生素的测定反相高效液相色谱法”；修改了维生素异构体的反相色谱分离条件，可同时分离测定种生育酚异构体；删除了苯并芘内标定量法，改用外标法定量；删除了“比色法”测定维生素。犌犅 食品安全国家标准食品中维生素犃、犇、犈的测定范围本标准规定了食品中维生素、维生素和维生素的测定方法。本标准第一法适用于食品中维生素和维生素的测定。本标准第二法适用于食用油、坚果、豆类和辣椒粉等食物中维生素的测定。本标准第三法适用于食品中维生素和维生素的测定。本标准第四法适用于配方食品中维生素或维生素的测定。第一法食品中维生素犃和维生素犈的测定反相高效液相色谱法原理试样中的维生素及维生素经皂化（含淀粉先用淀粉酶酶解）、提取、净化、浓缩后，或反相液相色谱柱分离，紫外检测器或荧光检测器检测，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。试剂 无水乙醇（）：经检查不含醛类物质，检查方法参见。抗坏血酸（）。氢氧化钾（）。乙醚（）：经检查不含过氧化物，检查方法参见。石油醚（）：沸程为 。无水硫酸钠（）。试纸（范围）。甲醇（）：色谱纯。淀粉酶：活力单位 。，二叔丁基对甲酚（）：简称。试剂配制 氢氧化钾溶液（）：称取 氢氧化钾，加入 水溶解，冷却后，储存于聚乙烯瓶中。石油醚乙醚溶液（）：量取 石油醚，加入 乙醚，混匀。犌犅 有机系过滤头（孔径为 ）。标准品 维生素犃标准品视黄醇（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。维生素犈标准品 生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准溶液配制 维生素标准储备溶液（）：准确称取 维生素标准品，用无水乙醇溶解后，转移入 容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为 。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在 下避光保存，有效期个月。临用前将溶液回温至，并进行浓度校正（校正方法参见附录）。维生素标准储备溶液（）：分别准确称取 生育酚、生育酚、生育酚和生育酚各 ，用无水乙醇溶解后，转移入 容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为 。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在 下避光保存，有效期个月。临用前将溶液回温至，并进行浓度校正（校正方法参见附录）。维生素和维生素混合标准溶液中间液：准确吸取维生素标准储备溶液 和维生素标准储备溶液各 于同一 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液中维生素浓度为 ，维生素各生育酚浓度为 。在 下避光保存，有效期半个月。维生素和维生素标准系列工作溶液：分别准确吸取维生素和维生素混合标准溶液中间液 、于 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该标准系列中维生素浓度为 、，维生素浓度为 、。临用前配制。仪器和设备 分析天平：感量为 。恒温水浴振荡器。旋转蒸发仪。氮吹仪。紫外分光光度计。分液漏斗萃取净化振荡器。犌犅 高效液相色谱仪：带紫外检测器或二极管阵列检测器或荧光检测器。分析步骤 试样制备将一定数量的样品按要求经过缩分、粉碎均质后，储存于样品瓶中，避光冷藏，尽快测定。试样处理警示：使用的所有器皿不得含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不得涂油；处理过程应避免紫外光照，尽可能避光操作；提取过程应在通风柜中操作。皂化 不含淀粉样品称取（精确至 ）经均质处理的固体试样或（精确至 ）液体试样于 平底烧瓶中，固体试样需加入约 温水，混匀，再加入 抗坏血酸和，混匀，加入 无水乙醇，加入 氢氧化钾溶液，边加边振摇，混匀后于 恒温水浴震荡皂化 ，皂化后立即用冷水冷却至室温。注：皂化时间一般为 ，如皂化液冷却后，液面有浮油，需要加入适量氢氧化钾溶液，并适当延长皂化时间。含淀粉样品称取（精确至 ）经均质处理的固体试样或（精确至 ）液体样品于 平底烧瓶中，固体试样需用约 温水混匀，加入 淀粉酶，放入 水浴避光恒温振荡 后，取出，向酶解液中加入 抗坏血酸和，混匀，加入 无水乙醇，氢氧化钾溶液，边加边振摇，混匀后于 恒温水浴振荡皂化 ，皂化后立即用冷水冷却至室温。提取将皂化液用 水转入 的分液漏斗中，加入 石油醚乙醚混合液，振荡萃取，将下层溶液转移至另一 的分液漏斗中，加入 的混合醚液再次萃取，合并醚层。注：如只测维生素与生育酚，可用石油醚作提取剂。洗涤用约 水洗涤醚层，约需重复次，直至将醚层洗至中性（可用试纸检测下层溶液值），去除下层水相。浓缩将洗涤后的醚层经无水硫酸钠（约）滤入 旋转蒸发瓶或氮气浓缩管中，用约 石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠次，并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发仪或气体浓缩仪上，于 水浴中减压蒸馏或气流浓缩，待瓶中醚液剩下约时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹至近干。用甲醇分次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至 容量瓶中，定容至刻度。溶液过 有机系滤膜后供高效液相色谱测定。犌犅 色谱参考条件色谱参考条件列出如下：）色谱柱：柱（柱长 ，内径，粒径），或相当者；）柱温：；）流动相：水；：甲醇，洗脱梯度见表；）流速：；）紫外检测波长：维生素为 ；维生素为 ；）进样量：；）标准色谱图和样品色谱图见。注：如难以将柱温控制在，可改用柱分离异构体，流动相为水和甲醇梯度洗脱。注：如样品中只含 生育酚，不需分离生育酚和生育酚，可选用 柱，流动相为甲醇。注：如有荧光检测器，可选用荧光检测器检测，对生育酚的检测有更高的灵敏度和选择性，可按以下检测波长检测：维生素激发波长 ，发射波长 ；维生素激发波长 ，发射波长 。表犆 色谱柱反相高效液相色谱法洗脱梯度参考条件时间 流动相流动相流速 标准曲线的制作本法采用外标法定量。将维生素和维生素标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以峰面积为纵坐标，以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线，计算直线回归方程。样品测定试样液经高效液相色谱仪分析，测得峰面积，采用外标法通过上述标准曲线计算其浓度。在测定过程中，建议每测定 个样品用同一份标准溶液或标准物质检查仪器的稳定性。分析结果的表述试样中维生素或维生素的含量按式（）计算：犡犞犳 犿（）式中：犡 试样中维生素或维生素的含量，维生素单位为微克每百克（），维生素单位为毫克每百克（）；根据标准曲线计算得到的试样中维生素或维生素的浓度，单位为微克每毫升（）；犌犅 犞 定容体积，单位为毫升（）；犳 换算因子（维生素：犳；维生素：犳 ）；试样中量以每 克计算的换算系数；犿 试样的称样量，单位为克（）。计算结果保留三位有效数字。注：如维生素的测定结果要用 生育酚当量（）表示，可按下式计算：维生素（）生育酚（）生育酚（）生育酚（）生育酚（）。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的。其他当取样量为，定容 时，维生素的紫外检出限为 ，定量限为 ；生育酚的紫外检出限为 ，定量限为 。第二法食品中维生素犈的测定正相高效液相色谱法原理试样中的维生素经有机溶剂提取、浓缩后，用高效液相色谱酰氨基柱或硅胶柱分离，经荧光检测器检测，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。水为 规定的一级水。试剂 无水乙醇（）：色谱纯，经检验不含醛类物质，检查方法参见。乙醚（）：分析纯，经检验不含氧化物，检查方法参见。石油醚（）：沸程为 。无水硫酸钠（）。正己烷（狀 ）：色谱纯。异丙醇（）：色谱纯。叔丁基甲基醚（）：色谱纯。甲醇（）：色谱纯。四氢呋喃（）：色谱纯。，二氧六环（）：色谱纯。，二叔丁基对甲酚（）：简称。有机系过滤头（孔径为 ）。犌犅 试剂配制 石油醚乙醚溶液（）：量取 石油醚，加入 乙醚，混匀，临用前配制。流动相：正己烷叔丁基甲基醚四氢呋喃甲醇混合液（），临用前配制。标准品 生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质；生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质；生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质；生育酚（，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准溶液配制 维生素标准储备溶液（）：分别称取种生育酚异构体标准品各 （准确至），用无水乙醇溶解于 容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为 。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在 下避光保存，有效期个月。临用前将溶液回温至，并进行浓度校正（校正方法参见附录）。维生素标准溶液中间液：准确吸取维生素标准储备溶液各 于同一 容量瓶中，用氮气吹除乙醇后，用流动相定容至刻度，此溶液中维生素各生育酚浓度为 。密封后，在 下避光保存，有效期半个月。维生素标准系列工作溶液：分别准确吸取维生素混合标准溶液中间液 、于 棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准系列中种生育酚浓度分别为 、。仪器和设备 分析天平：感量为。恒温水浴振荡器。旋转蒸发仪。氮吹仪。紫外分光光度计。索氏脂肪抽提仪或加速溶剂萃取仪。高效液相色谱仪，带荧光检测器或紫外检测器。分析步骤 试样制备将一定数量的样品按要求经过缩分、粉碎、均质后，储存于样品瓶中，避光冷藏，尽快测定。犌犅 试样处理警示：使用的所有器皿不得含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不得涂油；处理过程应避免紫外光照，尽可能避光操作。植物油脂称取 油样（准确至 ）于 的棕色容量瓶中，加入，加入 流动相超声或涡旋振荡溶解后，用流动相定容至刻度，摇匀。过孔径为 有机系滤头于棕色进样瓶中，待进样。奶油、黄油称取样品（准确至 ）于 的离心管中，加入，水浴融化，加入无水硫酸钠，涡旋，混匀，加入 流动相超声或涡旋振荡提取，离心，将上清液转移至浓缩瓶中，再用 流动相重复提取次，合并上清液至浓缩瓶，在旋转蒸发器或气体浓缩仪上，于 水浴中减压蒸馏或气流浓缩，待瓶中醚剩下约时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹干。用流动相将浓缩瓶中残留物溶解并转移至 容量瓶中，定容至刻度，摇匀。溶液过 有机系滤膜后供高效液相色谱测定。坚果、豆类、辣椒粉等干基植物样品称取样品（准确至 ），用索氏提取仪或加速溶剂萃取仪提取其中的植物油脂，将含油脂的提取溶剂转移至 蒸发瓶内，于 水浴中减压蒸馏或气流浓缩至干，取下蒸发瓶，用 流动相将油脂转移至 容量瓶中，加入，超声或涡旋振荡溶解后，用流动相定容至刻度，摇匀。过孔径为 有机系滤头于棕色进样瓶中，待进样。色谱参考条件色谱参考条件列出如下：）色谱柱：酰氨基柱（柱长 ，内径，粒径）或相当者；）柱温：；）流动相：正己烷叔丁基甲基醚四氢呋喃甲醇混合液（）；）流速：；）荧光检测波长：激发波长 ，发射波长 ；）进样量：。注：可用 硅胶柱（柱长 ，内径，粒径）分离种生育酚异构体，推荐流动相为正己烷与，二氧六环按（）的比例混合。标准曲线的制作本法采用外标法定量。将维生素标准系列工作溶液从低浓度到高浓度分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积。以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，计算直线回归方程。样品测定试样液经高效液相色谱仪分析，测得峰面积，采用外标法通过上述标准曲线计算其浓度。在测定过程中，建议每测定 个样品用同一份标准溶液或标准物质检查仪器的稳定性。犌犅 分析结果的表述试样中 生育酚、生育酚、生育酚或 生育酚的含量按式（）计算：犡犞犳 犿（）式中：犡 试样中 生育酚、生育酚、生育酚或 生育酚的含量，单位为毫克每百克（）；根据标准曲线计算得到的试样中 生育酚、生育酚、生育酚或生育酚的浓度，单位为微克每毫升（）；犞 定容体积，单位为毫升（）；犳 换算因子（犳