GB 15981-1995 消毒与灭菌效果的评价方法与标准.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 之 山 日邑 卜 二二 下 丁-A W S P&住1内人 言 布 石人任 二:+七二f=.&泪每勺火 困双未t f 9 1拼力达勺你淮G B 1 5 9 8 1 一1 9 9 5 E v a l u a t i n g me t h o d a n d s t a n d a r d f o r t h e e f f i c a c y o f d i s i n f e c t i o n a n d s t e r i l i z a t i o n 第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准1 主题内容与适用范围 本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。2 试剂 本标准所用试剂，凡未说明规格者，均为分析纯（A R)，水为蒸馏水。2.1 蛋白陈。2.2 葡萄糖。2.3 嗅甲酚紫酒精溶液：取澳甲 酚紫2.O g，溶于1 0 0 m L 9 5 乙 醇中。2.4 澳甲酚紫蛋白陈水培养基配制：蛋白脏 1 0.O g,葡萄糖 5.O g，溶于1 0 0 0 mL蒸馏水中，调p H值至7.0-7.2，然后再加2%澳甲酚紫酒精溶液0.6 mL，摇匀后，按 5 mL 管，分装包口，置压力蒸汽灭菌器中，于 1 1 5 C灭菌 4 0 m i n 后备用。3 指示菌 嗜热脂肪杆菌芽胞(A T C C 7 9 5 3 或S S I K 3 1）菌片，含菌量为5 X 1 0 -5 X 1 0 6 c f u 片，1 2 1 C下，杀灭9 0 微生物所需时间D 12，值为 1.3-l.9 m in，杀灭时间（K T值）为夏1 9 m in，存活时间（S T值）为）3.9 mi n o4 化学指示剂 需用卫生部批准的化学指示剂。5 技术要求 压力蒸汽灭菌器压力，MP a/c m 2温度，C灭菌时间，m m 下排气式0.0 7 0 1 1 5 4 0 0.10 5 12 1 30 预真空式0.2 1 0 1 3 4 4 6国家技术监督局 1 9 9 5 一 1 2 一 1 5 批准1 9 9 6 一 0 7 一 0 1 实施 G s 1 5 9 8 1 一 1 9 9 56 检测方法6.1 生物学指标（用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据）。6.1.1 将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋 内，置于标准试验包中心部位。6.1.2 灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包（由3 件平纹长袖手术衣，4 块小手术巾，2 块中手术巾，1 块大手术巾，3 0 块 l 0 c m X l 0 c m,8 层纱布敷料包裹成2 5 c m X 3 0 c m X 3 0 c m大小）。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（2 2 c m X 1 3 c m X 6 c m）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。6.1.3 经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入澳甲酚紫葡萄糖蛋白陈水培养基中，5 6 C培养4 8 h，观察培养基颜色变化。6 _ 2 化学指标 在物品包外用化学指示胶带，可作为物品是否经过灭菌的处理标志。在物品包 内中心部位用化学指示剂，可作为物品是否灭菌的参考标志。7 结果判定及评价7.1 同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的澳甲酚紫蛋白陈水培养基全部不变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的澳甲酚紫蛋白陈水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不合格。7.2 化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时，或熔化时作为灭菌合格的参考标准。第二篇紫外线表面消毒效果评价方法与标准8 主题内容与适用范围 本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测方法。本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。9 指示菌9.1 大肠杆菌（8 0 9 9 或A T C C 2 5 9 2 2).9.2 枯草杆菌黑色变种芽胞（A T C C 9 3 7 2).1 0 物理学指标1 0.1 在电压2 2 0 V时，普通3 0 W直管型紫外线灯，在室温为2 0 -2 5 的使用情况下，2 5 3.7 n m紫外线辐射强度（垂直l m处）应）7 0 II W/c m 2 01 0.2 在电压 2 2 0 V时，高强度紫外线灯，在室温为 2 0 -2 5 的使用情况下，2 5 3.7 n m 紫外线辐射强度（垂直l m处）应2 0 0 t W/c m 2 01 0.3 照射剂量按式（1)计算：剂量妞W s/c m2）二强度印W/c m 2)X时间（s)（1）1 1 检测方法1 1.1 物理学检测方法1 1.1.1 灯管的紫外线强度（rL W/c m2）用中心波长为2 5 3.7 n m的紫 外线强度测定仪（标定有效期内），在灯管垂直位置 l m处测定。G B 1 5 9 8 1 一 1 9 9 51 1-1.2 在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对象的实际距离测定。1 1-1.3 表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到 2 0 0 0 0K W s/c m z，对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到1 0 0 O O O JA W s/c m 2,1 1.2 生物学检测方法1 1.2.1 采用载体定量消毒试验。载体制备按本标准附录 C进行。1 1.2.2 开启紫外线灯 5 min 后，将 8 个染菌玻片平放于灭菌器皿中，水平放于适当距离照射，于 4 个不同间隔时间各取出2 个染菌玻片，分别投入2 个盛有5 m L洗脱液（(1 吐温8 0,1 蛋白陈生理盐水）试管中，振打8 0 次。1 1.2.3 经适当稀释后，取。.5 m L洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，放 3 7 培养4 8 h 作活菌计数。1 1.2.4 阳性对照，除不作照射处理外，取2 个染菌玻片分别投入么 个盛有5 m L洗脱液中振打8 0 次，余按 4.2.3 进行。1 1.2.5 计算杀灭率 ，。、阳性对照回收菌数一试验组 回收菌数、，杀 灭率（）1 Iti l y J N H书 vln r y a s n 月 IW 7 S 1 L H-1 r X 1 0 0.（2）i J.I、一、阳性 对照 回收菌 数1 2 判定标准1 2.1 对指示菌杀灭率9 9.9 判为消毒合格。1 2.2 达物理学检测标准时，作为消毒合格的参考标准。第三篇液体消毒剂消毒效果评价方法与标准1 3 主题内容与适用范围 本方法具体规定了消毒剂消毒效果生物学检测方法及其评价标准。本方法适用于消毒剂对各种物体的消毒效果评价。1 4 理化指标 将消毒剂置 2 0 士2 C 水浴中，测定在使用浓度下杀灭指示微生物达到消毒或灭菌所需的最短时间(mi n)。1 5 指示微生物1 5.1 细菌1 5.1.1 细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（A T C C 6 5 3 8)、大肠杆菌（8 0 9 9 或A T C C 2 5 9 2 2),1 5.1.2 细菌芽胞：枯草杆菌黑色变种芽胞（A T C C 9 7 3 2),1 5.2 真菌：白色念珠菌（A T C C 1 0 2 3 1).1 5.3 乙型肝炎表面抗原：纯化抗原（(1.O m g/m L),1 6 检测方法1 6.1 中和试验（见附录A).1 6.2 消毒剂定性消毒试验（见附录B),1 6.3 消毒剂定量消毒试验（见附录C)o1 6.4 消毒剂杀菌能量试验（见附录D)o1 6.5 乙型肝炎表面抗原（H B s A g）抗原性破坏试验（见附录E),G B 1 5 9 8 1 一 1 9 9 51 了 消毒效果评价标准1 7.1 对细菌和真菌的杀灭率）9 9.9%，对H B s A g，将检测方法灵敏度1 0 倍或 5 X1 0 倍（载体试验）的H B s A g 抗原性破坏，可判为消毒合格。1 7.2 对枯草杆菌黑色变种芽胞全部杀灭，可判为灭菌合格。1 7.3 在实际应用中消毒效果评价以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为该消毒剂达到实用消毒所需的浓度和时间。2 59 G B 1 5 9 8 1 一 1 9 9 5 附录A 中和剂中和效果试验 （补充件）A 1 内容提要 为了准确评价消毒剂对微生物的杀灭作用，消毒试验中要求选择适当中和剂。所选中和剂不仅能及时中止消毒剂的杀微生物作用，且 中和剂本身及其与消毒剂的反应产物（下称中和产物）尚需对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不 良影响。A 2 培养基和试剂A 2.1 营养琼脂培养基 成分：蛋白陈1 0.0 馆 牛肉膏3.O O g 氯化钠5.O O g 琼脂1 5.O O g 蒸馏水1 0 0 0.O O m L 制法：除琼脂外，其他成分溶解于蒸馏水中，调 p H至 7.2-7.4，加入琼脂后加热溶解，过滤分装，经1 2 1 C、压力蒸汽作用 3 0 m i n，灭菌后备用。A 2.2 0.0 3 m o 1/l,磷酸盐缓冲液（p H7.2-7.6，下称 P B S).成分：磷酸氢二钠2.8 4 g 磷酸二氢钾1.3 6 g 蒸馏水1 0 0 0.O O m L 制法：将磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解于蒸馏水中，p H为7.2-7.4，分装，经1 2 1 0C,3 0 m i n压力蒸汽灭菌后备用。A 3 器材A 3.1 锥形烧瓶。A 3.2 平皿（直径 9 c m)oA 3.3 量筒。A 3.4 精密 p H试纸。A 3.5 无菌试管。A 3.6 无菌刻度吸管（1.0,5.O,1 0.O m L)oA 3.7 恒温培养箱。A 3.8 冰箱。A 3.9 菌落计数器。A 3.1 0 酒精灯。A 4 中和剂（注明生产厂家，批号）A 5 操作方法A 5.1 用 P B S将指示菌制成 5 X 1 0 5-5 X 1 0 6 c f u/m L悬液。G B 1 5 9 8 1 一 1 9 9 5A 5.2 将 消毒剂用灭菌蒸馏水配制成 3 种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知该消毒剂 l O m m抑杀指示菌9 9.9 以上的最低有效浓度。A 5.3 取消毒剂l O m m抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等当量中和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度。A 5.4 中和剂选择试验时，先将消毒剂1.O mL与中和剂溶液 9.O m L混合，制成中和产物溶液，再按表Al 分组进行。表 A l 中和剂选择试验月才拼 然后，倾注平板置3 7 C 培养4 8 h，计数菌落数，按稀释倍数计算出回收菌数（c f u/m L)oA 6 中和试验结果报告方法（如表A 2)表 A 2 中和试验结果举例份片$-QIftM f,cfu/mL3 4 5 64.67 X 106 4.83 X 106 4.11 X 106 05.81X106 5.89X106 5.78X106 03.31X106 5.31X106 5.21X106 03.20X10 5.03 X 106 5.18 X 106 0卜 3,4,5 组间误差率计算公式误 差 率（，一 于R-3 gli f t C I+I 9fl 粤4 9 黔I+1-911J 911j=-一X 1 0 0 （Al）A 7 判定标准A 7.1 3,4,5 组菌数相似，其误差率1 0%.A 7.2 6 组无菌生长。A 7.3 2 组菌数明显少于 3,4,5 组。A 7.4 1 组不长菌或明显少于 2 组。符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物对指示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂。A 8 消毒试验用中和剂浓度的选择 按A 5.4 步骤进行，按A 7.1-7.4的标准判定。G B 1 5 9 8 1 一 1 9 9 5 附录B 消毒剂定性消毒试验 （补充件）B 1 内容提要 定性消毒试验是测定受