GB 1903.52-2021 食品安全国家标准 食品营养强化剂 氯化高铁血红素.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B1 9 0 3.5 22 0 2 1食品安全国家标准食品营养强化剂 氯化高铁血红素2 0 2 1-0 9-0 7发布2 0 2 2-0 3-0 7实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布G B1 9 0 3.5 22 0 2 11 食品安全国家标准食品营养强化剂 氯化高铁血红素1 范围本标准适用于以检疫合格动物的血液及血球粉为主要原料,采用冰乙酸法、酶解和乙酸结合法经加工制得的食品营养强化剂氯化高铁血红素。2 分子式、结构式和相对分子质量2.1 分子式C3 4H3 2C l F e N4O42.2 结构式2.3 相对分子质量6 5 1.9 5(按2 0 1 8年国际相对原子质量)3 技术要求3.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。表1 感官要求项 目要 求检验方法色泽蓝色或黑色状态晶体或粉末取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中,在自然光线下,观察其色泽和状态3.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。G B1 9 0 3.5 22 0 2 12 表2 理化指标项 目指 标检验方法氯化高铁血红素含量(C3 4H3 2C l F e N4O4),w/%9 0.0附录A中A.3铁含量(以F e计),w/%7.7G B5 0 0 9.9 0干燥减量,w/%5.0G B5 0 0 9.3(直接干燥法)总砷(以A s计)/(m g/k g)2.0G B5 0 0 9.7 6或G B5 0 0 9.1 1铅(P b)/(m g/k g)2.0G B5 0 0 9.7 5或G B5 0 0 9.1 2总汞(以H g计)/(m g/k g)0.5G B5 0 0 9.1 73.3 微生物微生物限量应符合表3的规定。表3 微生物限量项 目采样方案a及限量ncmM检验方法沙门氏菌/2 5g500G B4 7 8 9.4金黄色葡萄球菌/(C F U/g)511 0 010 0 0G B4 7 8 9.1 0第二法 a样品的采样及处理按G B4 7 8 9.1执行。G B1 9 0 3.5 22 0 2 13 附 录 A检 验 方 法A.1 一般规定除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯试剂和G B/T6 6 8 2中规定的三级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按G B/T6 0 1、G B/T6 0 2、G B/T6 0 3的规定制备。所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。A.2 鉴别试验A.2.1 试剂和材料A.2.1.1 硝酸:分析纯。A.2.1.2 硫化钠:分析纯。A.2.1.3 硫酸溶液:取5m L浓硫酸,缓慢加入约8 0m L水中,再加水定容至1 0 0m L。A.2.1.4 盐酸溶液:取5 0m L浓盐酸,加水稀释定容至1 0 0m L。A.2.1.5 硫氰酸铵溶液:溶解8g硫氰酸铵于适量水中,用水稀释至1 0 0m L。A.2.1.6 吡啶氢氧化钠溶液:溶解1.2g氢氧化钠于2 0 0m L水中,再加入1 0 0m L吡啶,混合。A.2.1.7 氨溶液:取氨水4 0 0m L,用水稀释至10 0 0m L。A.2.2 仪器和设备A.2.2.1 水浴箱。A.2.2.2 分析天平:感量为0.1g和0.0 0 1g。A.2.3 鉴别方法A.2.3.1 呈色试验A.2.3.1.1 称取0.0 1g(精确至0.0 0 1g)氯化高铁血红素试样,加入1m L硫酸溶液(A.2.1.3)和1m L硝酸(A.2.1.1)溶解后水浴蒸干。残留物加入1 0m L盐酸溶液(A.2.1.4)溶解,加入数滴硫氰酸铵溶液(A.2.1.5),摇匀,溶液应呈现暗红色。A.2.3.1.2 称取0.0 0 5g(精确至0.0 0 1g)氯化高铁血红素试样,加入1 0m L吡啶氢氧化钠溶液(A.2.1.6)溶解,再加入0.1g硫化钠,摇匀,溶液应呈现暗红色。A.2.3.1.3 称取0.0 1g(精确至0.0 0 1g)氯化高铁血红素试样,加入5m L硝酸后摇匀,加热,溶液应呈现黄色。冷却后,用氨溶液(A.2.1.7)将p H调整至碱性,溶液应呈现橙黄色。A.2.3.2 红外光谱法采用溴化钾压片法,按照G B/T6 0 4 0的规定进行试验,试样的红外光谱应与对照的谱图一致。对照谱图见附录B。G B1 9 0 3.5 22 0 2 14 A.3 氯化高铁血红素(C3 4H3 2C l F e N4O4)含量的测定A.3.1 紫外分光光度法A.3.1.1 方法提要氯化高铁血红素用0.1m o l/L氢氧化钠溶液溶解后,采用紫外分光光度法测定,在3 8 6n m1n m处有最大吸收峰,测定吸光度值A,根据标准工作液浓度计算试样含量。A.3.1.2 试剂与材料A.3.1.2.1 0.1m o l/L氢氧化钠溶液:称取4.0g氢氧化钠,加入适量水溶解,用水定容至1L。A.3.1.2.2 氯化高铁血红素标准物质(H e m i n):C3 4H3 2C l F e N4O4,C A S:1 6 0 0 9-1 3-5,纯度9 7%。A.3.1.2.3 氯化高铁血红素标准储备液:准确称取氯化高铁血红素标准物质2 0m g(精确至0.1m g),加0.1m o l/L氢氧化钠溶液(A.3.1.2.1)定容至1 0 0m L,配制成浓度为2 0 0.0m g/L的标准储备液。该溶液于棕色试剂瓶中04避光保存,有效期3d。A.3.1.2.4 氯化高铁血红素标准工作液:分别吸取适量氯化高铁血红素标准储备液(A.3.1.2.3),用0.1m o l/L氢氧化钠溶液稀释配制成标准工作液。A.3.1.3 仪器和设备A.3.1.3.1 紫外分光光度计。A.3.1.3.2 分析天平:感量为0.1g和0.0 0 01g。A.3.1.4 分析步骤称取适量的试样,加入0.1m o l/L氢氧化钠溶解并定量稀释成每1m L约含8g氯化高铁血红素试样溶液。取适量试样溶液,采用紫外分光光度法验证试样溶液的最大吸收峰应在3 8 6n m1n m。确保标准工作曲线及试样样液的吸光度值A在0.30.7。当吸光度值A超过此线性范围时,可适当加大试样的稀释倍数。分别取氯化高铁血红素标准溶液和试样液,以0.1m o l/L的氢氧化钠溶液为空白,在3 8 6n m1n m波长处测定吸光度值A。A.3.1.5 结果计算氯化高铁血红素的质量分数W1按式(A.1)计算。W1=AcVAsm10 0 01 0 0%(A.1)式中:A 试样液中氯化高铁血红素的吸光度值;c 氯化高铁血红素标准工作溶液的浓度,单位为毫克每升(m g/L);V 最终试样液的定容体积,单位为升(L);As 氯化高铁血红素标准工作溶液的吸光度值;m 最终试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g)。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准,在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。G B1 9 0 3.5 22 0 2 15 A.3.2 高效液相色谱法A.3.2.1 方法提要氯化高铁血红素试样用0.1m o l/L氢氧化钠溶液溶解提取后,用高效液相色谱仪测定,保留时间定性,峰面积外标法定量。A.3.2.2 试剂与材料A.3.2.2.1 甲醇:色谱纯。A.3.2.2.2 乙酸:色谱纯。A.3.2.2.3 乙酸溶液:吸取6m L乙酸(A.3.2.2.2),用水定容至1L。A.3.2.2.4 氯化高铁血红素标准物质(H e m i n):见A.3.1.2.2。A.3.2.2.5 氯化高铁血红素标准储备液:见A.3.1.2.3。A.3.2.2.6 氯化高铁血红素标准工作液:临用时用0.1m o l/L氢氧化钠溶液稀释氯化高铁血红素标准储备液配制相应标准工作液。A.3.2.2.7 滤膜:0.4 5m,水相。A.3.2.3 仪器和设备A.3.2.3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。A.3.2.3.2 分析天平:感量为0.1g和0.0 0 01g。A.3.2.4 分析步骤称取0.0 2g(精确至0.0 0 1g)试样于1 0 0m L的容量瓶中,用0.1m o l/L氢氧化钠溶液溶解并定容至刻度,摇匀后供高效液相色谱测定。A.3.2.5 参考色谱条件A.3.2.5.1 色谱柱:C1 8柱,2 5 0mm4.6mm,粒径5m,或同等性能的色谱柱。A.3.2.5.2 流动相:甲醇0.6%乙酸=7 03 0(体积比)。A.3.2.5.3 柱温:3 5。A.3.2.5.4 流速:1m L/m i n。A.3.2.5.5 检测波长:3 9 9n m。A.3.2.5.6 进样量:1 0L。A.3.2.6 色谱测定在上述色谱条件下,分别对试样和标准溶液进行测定,氯化高铁血红素的保留时间约为5.0 2 1m i n,以保留时间定性,试样的保留时间应与标准溶液的相对保留时间一致,偏差在2.5%以内。同时记录峰面积,根据标准工作液得到试样氯化高铁血红素的浓度,标准品和试样的色谱图参见附录C。A.3.2.7 结果计算氯化高铁血红素的含量W2按式(A.2)计算。W2=A1cVAsm10 0 01 0 0%(A.2)G B1 9 0 3.5 22 0 2 16 式中:A1 样液中氯化高铁血红素的色谱峰面积;c 氯化高铁血红素标准储备液的浓度,单位为毫克每升(m g/L);V 最终样液的定容体积,单位为升(L);As 氯化高铁血红素标准储备液的色谱峰面积;m 试样的质量,单位为克(g)。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准,在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。G B1 9 0 3.5 22 0 2 17 附 录 B氯化高铁血红素的标准红外光谱图 氯化高铁血红素的标准红外光谱图见图B.1。图B.1 氯化高铁血红素的标准红外光谱图G B1 9 0 3.5 22 0 2 18 附 录 C氯化高铁血红素标准品的高效液相色谱图 氯化高铁血红素标准品的高效液相色谱图见图C.1。图C.1 氯化高铁血红素标准品的高效液相色谱图