中华人民共和国国家标准GB5413.20—20132013-11-29发布2014-06-01实施食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定GB5413.20—2013I前言本标准代替GB/T5413.20—1997《婴幼儿配方食品和乳粉胆碱的测定》。本标准与GB/T5413.20—1997相比，主要变化如下：——修改了标准的名称；——修改了用于酶反应的显色剂成分；——增加了第二法雷氏盐分光光度法。GB5413.20—20131食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。第一法酶比色法2原理试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质，其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1三羟甲基氨基甲烷[(CH2OH)3CNH2]。3.1.2苯酚(C6H5OH)。3.1.3浓盐酸(HCl)。3.1.4氢氧化钠(NaOH)。3.1.5胆碱氧化酶：置于-20℃保存。3.1.6过氧化物酶：置于2℃~8℃保存。3.1.74-氨基安替比林(C11H13N3O)。3.1.8磷脂酶D：置于-20℃保存。3.2试剂配制3.2.1盐酸(1mol/L)：量取85mL浓盐酸加水稀释至1000mL。3.2.2盐酸(3mol/L)：量取125mL浓盐酸加水稀释至500mL。3.2.3Tris缓冲溶液（0.05mol/L）：pH=8.0±0.2。称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶入500mL蒸馏水中，用1mol/L盐酸调pH至8.0±0.2，用蒸馏水定容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。3.2.4用于酶反应的显色剂：取100~120活力单位的胆碱氧化酶、250~280活力单位的过氧化物酶、75个~100个活力单位的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林，50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。临用时配制。3.2.5氢氧化钠溶液(500g/L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。GB5413.20—201323.3标准品胆碱酒石酸氢盐标准品（C9H19NO7）：纯度≥99%。3.4标准溶液配制3.4.1胆碱氢氧化物标准贮备溶液（2.5mg/mL）：称取在102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523mg置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。冷藏于4℃±2℃冰箱中，保存不超过1周。3.4.2胆碱氢氧化物标准工作溶液（250µg/mL）：吸取10.0mL标准贮备溶液于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。临用时配制。4仪器和设备4.1天平：感量为0.01g和0.1mg。4.2恒温水浴锅：温度可控制在70℃±2℃和37℃±2℃。4.3pH计：精度0.01。4.4分光光度计。5分析步骤5.1试样制备...
