QBT 2738-2005 日化产品抗菌抑菌效果的评价方法.pdf

I CS 7 1.1 0 0.3 5分类号:Y4 3备案号:1 6 4 1 8-2 0 0 5中 华 人 民 共 和 国 轻 二 行 业 标 准Q B/T 2 7 3 8 一2 0 0 5日化产品抗菌抑菌效果的评价方法T e s t me t h o d s f o r e v a l u a t i n g d a i l y c h e mi c a l p r o d u c t s i n a n t i b a c t e r i a l a n d b a c t e r i o s t a t i c e ffic a c y2 0 0 5-0 7-2 6发布2 0 0 6-0 1-0 1 实施中华人民共和国国家发展和改革委员会发布QB/T 2 7 3 8 一2 0 0 5目次前言 。I Q1 范围 12 规范性引 用文件.,.13 术语和定义 。14 检验日化产品抗菌、抑菌效果的实验室及无菌操作的基本要求 25 样品采集 。26 日化产品抗菌、抑菌效果评价原则 。27 日化产品抗菌、抑菌效果检验方法 。37.1 日化产品抗菌、抑菌效果检验方法分类 。37.2 抗菌型日化产品的杀菌效果检验方法(悬液定量法)37.3 抑菌型日化产品的抑菌效果检验方法(悬液定量法)。77.4 抗菌或抑菌型织物类洗涤剂抗菌或抑菌效果检验方法(模拟法)一 87.5 抑菌型日化产品的抑菌效果检验方法(抑菌环法)。1 07.6 抑菌型 人体皮 肤清洁类产品抑菌效果检验方法(滞留法)1 18 日化产品抗菌、抑菌效果稳定性检验方法 。1 4附录A(资料性附录)抗菌、抑菌有效成分含量的测定方法 。1 5A.1 有效氯含量的测定 1 5A.2 活性氧含量的测定 。1 5A.3 有效碘含量的测定 。1 6A.4 阳离子表面活性剂含量的测定 。1 7A.5 溶菌酶中蛋白质含量的测定 。1 8A.6 N-(4-氯苯基)-N-(3 4 一 二氯苯基)服含量的钡(定 1 9A.7 毗咤 硫酮锌含量的测定 2 1A.8 三氯经基二苯醚含量的测定 。2 2参考文献 。2 4QB/T 2 7 3 8 一2 0 0 5m l1舌本标准的附录A为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准 由全国表面活性剂洗涤用品标准化中心归口。本标准起草单位:国家洗涤用品质量监督检验中心(太原)、广州蓝月亮有限公司、西安开米股份有限公司、广州立白企业集团有限公司、浙江纳爱斯集团有限公司、广东省微生物分析检测中心。本标准主要起草人:张宝莲、林尚鹏、周高怀、金玉华、朱会苏、欧阳友生。本标准首次发布。Q B/T 2 7 3 8 一2 0 0 5日化产品抗菌抑菌效果的评价方法1 范围 本标准规定了具有特殊卫生功能的日化产品抗菌、抑菌效果的检测方法及评价标准。本标准适用于常见洗涤用品、人体皮肤清洁用品的抗菌、抑菌性能测试，其他日化产品也可根据用途选择采用。2 规 范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的 各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。Q B/T 2 7 3 9-2 0 0 5 洗涤用品常用试验方法 滴定分析(容量分析)用试验溶液的制备3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 抗菌a n t i b a c t e r i a l 采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。3.2 抑菌 b a c t e r i o s t a s i s 采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。3.3 载 体c a r r i e r 试验微生物的支持物。3.4 生物负载 b io b u r d e n 被测试的一个单位物品上承载活微生物的总数。3.5 杀灭率 k i l l i n g r a t e 人 R 在微生 物杀灭 试验中，微生物数量减少的 值?注:杀灭率用%表示3.6 杀灭时间 k i l l i n g t i m e K T 用于生物指示物抗力鉴定时，指受试指示物样本，经杀菌因 子作用后全部样本无菌生长的最短作用时间。注:杀灭时间用m i n 表示。Q B/T 2 7 3 8 一2 0 0 53.7 菌落形成单位 c o l o n y f o r m i n g u n i t c f o (单位名称)在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基_ 生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。3.8 中 和P al n e u t r a l i z e r 在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物与杀菌剂的混悬液中和微生物表面上残留的杀菌剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。3.9 中 和产物 p r o d u c t o f n e u t r a l i z a t i o n 指中和剂与 杀菌剂作用后的产物。4 检验日化产品抗菌、抑菌效果的实验室及无菌操作的基本要求4.1 微生物买验至应米取封闭式布局，建筑应便于清洁、消毒。为避免污染应在相对正压洁净条件下进行因特殊需要用致病菌作指示菌时，则应在生物安全柜(负压)内进行。4.2 试验开始前，应以湿式方法清洁台 面和打扫室内 地面，然后以紫外线或其他方法对实验室内空气进行消毒。4.3 实验人员应穿戴工作服、日罩、帽子;进行无菌检验时，应经风淋后进入实验室。然后，正确穿戴好无菌隔离衣、帽和口罩。4.4 侮吸取一次小同样液应更换无菌吸管，接种环(针)应在火焰上烧灼灭菌后，方可再次使用。4.5 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水4.6 要求无菌的试剂，如蒸馏水、磷酸盐缓冲液、培养基、牛血清 白蛋白、标准硬水、中和剂等，均应灭菌或过滤除菌。4.7 无菌器材和试剂，使用前应检查容器或包装的完整性，有破损者不应使 用4.8 止在使用的无菌器材和试剂不应长时间暴露于空气中。4.9 移液或接种时，应将试管 口和琼脂平板靠近火焰，防止污染。4.1 0 所有用过的污染器材，应立即放入盛有消毒液的容器中，以防止对周围环境和清洁物品造成污染4.1 1 若不慎发生微生物培养物摔碎或其他试验微生物泄漏事故时，不论是否具有致病性，均应立即对污染及n 能波及的区域进行消毒处理4.1 2 全部试验结束后，应按常规对室内空气和环境表面进行消毒处理。5 样品采集 为使样品具有良好的代表性，应于同一批号州个运输包装中至少随机抽取 1 2 件最小销售包装样品，其中4 件留 样，4 件做抑菌或杀菌性能测试，4 件做稳定性测试。抽样的 最小 包装不 应有破裂，检验前不应启开日化产品抗菌、抑菌效果评价原则6.1 标准中杀 菌试验测定方法用于考核产品的 抗菌作用。6.2 标准中抑菌试验测定方法用于考核产品的抑菌作用。6.3 检验用指示微生物 依据厂、品执行标准或说明书适用范围进行表 1 中试验菌(由国家级或省级菌种保藏管理中心提供)的选择检测，也可根据产 Q的使用要求增加其他菌种作为检验菌种。QB/T 2 7 3 8一2 0 0 5表 1 抗菌、抑菌日化产品试验中微生物的选择试验菌名称菌株标准号抗菌、抑菌日化产品适用范围 金黄色葡萄球菌(S ta p h y lo c o c c u s a u r e u s)A T C C 6 5 3 8或A T C C 2 7 2 1 7手、足、皮肤和乳膜、织物及一般物品表面 大肠埃希氏菌(E s c h e r i c h ia c o l i)8 0 9 9 或 A T C C 2 5 9 2 2 或A T C C 1 1 2 2 9乎、餐饮具、瓜果和蔬菜、织物及一般物品表面白假丝酵母菌(白色念珠菌)(C a n d id a a l b ic a n s)A T C C 1 0 2 3 1手、足、皮肤和豁膜铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)(P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a)A T C C 1 5 4 4 2皮肤和豁膜6.4 作用浓度 按产品明示的标准要求进行。6.5 作用时间 按产品明示的标准要求进行。6.6 结果报告 测试结果报告是试验情况和结果的书面表达，结果报告至少应包括:a)试验菌种;b)作用浓度;c)作用时间;d)效果评价结果;e)对测定结果有影响的其他因素。7 日化产品抗菌、抑菌效果检验方法7.1 日化产品抗菌、抑菌效果检验方法分类 见表 2 表 2 日化产品抗菌、抑菌检验方法分类类别方法名称表 示 形 式适用范围本标准对应章节杀菌试验悬 液 定 量 法即 时 杀 菌抗菌型日化产品7 2模拟法即时杀菌抗菌型织物类洗涤剂7.4抑菌试验滞留法长效抑菌抑菌型人体皮肤清洁产品7.6悬液定量法即时抑菌抑菌型日化产品7.3模拟法即时抑菌抑菌型织物类洗涤剂7 4抑菌环法即时抑菌抑菌型日化产品7.57.2 抗菌型日化产品的杀菌效果检验方法(悬液定量法)7.2.1 设备 a)锥形烧瓶;b)平皿(直径9 c m);c)量筒:QB/T 2 7 3 8 一2 0 0 5 d)e)f)g)h)i)J)k)m)n)0)P)7.2.2 a)精密P H 试纸;无菌试管;无菌刻度吸 管(1.O m L,5.O m L,I O.O m L);恒温培养箱;冰箱;菌落计数器;酒精灯;电动混合器;恒温干燥箱;恒温水浴锅;湿热灭菌锅;电子天平;生物安全柜等微生物试验必备仪器。试剂 营养琼脂培养基 称取蛋白 陈I O.O g、牛肉 膏5.0 g.氯化钠5.0 g，加 蒸馏水1 0 0 0 M L 溶解，调P H至7.2 7.4,然后加入琼脂1 5.0 g 加热溶解，分装，于 1 2 1 压力蒸汽灭菌2 0 m i n 后备用。沙堡琼脂培养基 称取葡萄糖4 0.0 g、蛋白 膝 1 0.0 g,琼脂2 0.0 g、加蒸馏水 1 0 0 0 M L，将上述成分混合 后，力 热至完全溶解。调P H至(5.6 士。.2)，于1 1 5 压力蒸汽灭菌3 0 m i n 后备用。磷酸盐缓冲液(P B S)(0.0 3 m o l/L)称取无水磷酸 氢二 钠 2.8 3 g、磷酸二氢钾 1.3 6 g，加蒸馏水 1 0 0 0 M L，待完全溶解后，调P H 至 7.2 7.4，经 1 2 1 压力蒸汽灭菌 2 0 m i n后备用。标准硬水(硬度3 4 2 m g/L)称 取 氯 化 钙(C a C l 2)0.0 3 4 g,氯 化 镁(M g C l2.6 H 2 0)0.1 3 9 g，加蒸 馏 水1 0 0 0 M L，经1 2 1 0C 力蒸汽灭菌 2 0 m i n后备用。中和剂 几种常见中和剂:1)硫代硫酸钠5.0 g.蒸馏水 1 0 0 0 M L;2)磷酸二氢钾 1.3 6 g.磷酸氢二钠2.8 3 g、卵磷脂 1 0.0 g、甘氨酸1 0.0 g.3 0.0 g 吐温8 0,蒸馏水 1 0 0 0 M L;3)磷酸二氢钾1.3 6 g、磷酸氢二 钠2.8 3 g,卵 磷脂3.0 g.2 0.0 g 吐温8 0.蒸馏水1 0 0 0 m L;4)2 0.0 g 吐 温8 0、硫代硫酸钠 1 0.0 g,P B S 1 0 0 0 n i L.注:D用于氯型杀菌剂;2)、3)用于非氧化型杀菌剂;4)用于氧型杀菌剂。菌液制备 (1)细菌繁殖体悬液的制备 1)取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌 种融化分散。取含营养肉汤培养基 5.0 M L-1 0.0 M L试管，滴入少许菌种悬 液，置3 7 0C 培养 1 8 h-2 4 h。用接种环取第1 代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于 3 7 培养 1 8 h-2 4 h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 3 7 0C 培养 1 8 h-2 4 h，即 为第3 代培