QBT 2306-1997 耐高温α-淀粉酶制剂.pdf

Q B/T 2 3 0 6 一1 9 9 7前言 耐高温a-淀粉醉制剂是一种具有较高耐热性的内切酶，其制剂有别于普通a t-淀粉酶制剂。现已广泛应用于食品和其他工业。本标准将产品分为两种剂型，三个质量等级。其中优等品和一等品用于食品工业，所以，卫生指标非等效采用1 9 7 2 年联合国粮农组织和世界卫生组织(F A O/WH O)于日内瓦制定的 食品工业用酶卫生要求。由于合格品用于其它工业，所以未设立卫生指标。理化指标是参考国外各大醉公司的先进企业标准，并结合我国生产实际制定的。醉活力的侧定第一法为分光光度法，其吸光度与醉浓度对照表列人附录A中。附录A是“标准的附录”。侧定酶活力时，底物的质t对分析结果影响很大。故本标准规定分析醉活力要统一使用浙江菱湖食品 化工 联合公司 生产的、标 有 专供醉制荆侧 定 用的“可溶性淀粉”试荆作底 物。如暂时 购不到，而使 用其他厂生产的“可溶性淀粉，时，附必须做对照试验。本标准由中国轻工总会食品造纸部提出。本标准由全国食品发醉标准化中心技术归口。本标准起草单位:无锡星达生物工程有限公司、上海市工业徽生物研究所、中国食品发醉工业研究所、天津轻工业学院、烟台星达生物工程有限公司。本 标 准 主 要 起 草人:霍 兴云、吴 炳炎、胡 学 智、田 栖 静、王 福荣、单 守 水，中华人民共和国轻工行业标准耐高温“一 淀粉酶制剂Q B/T 2 3 0 6 一 1 9 9 71 范 围 本标准规定了耐高温。一 淀粉酶制剂的术语与定义、技术要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存要求。本标准适用于以地衣芽抱杆菌(或其他变异菌株)经深层发酵培养、提纯制取的耐高温a-淀粉酶制剂2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B 6 0 1-1 9 8 8 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备 G B 4 7 8 9-1 9 9 4 食品卫生微生物学检验 G B/T 5 0 0 9.1 1-1 9 9 6 食品卫生理化检验食品中总砷的测定方法 G B/T 5 0 0 9.1 2-1 9 9 6 食品卫生理化检验食品中铅的侧定方法 G B 8 4 5 1-1 9 8 7 食品添加荆中重金属限A试验法 Q B/T 1 8 0 3-1 9 9 3 S业酶制剂通用试验方法 Q B/T 1 8 0 4-1 9 9 3 工业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存3 术语与定义3.1 耐A温a-淀粉酶 由精选的地衣芽抱杆菌经发醉提纯制取的、具有较高耐热性的a-淀粉酶制荆。3.2 酶活力单位 在7 0 c,P x 6.。条件下，l m i n 液化l m g 可溶性淀粉成为枷精所需要的酶量，即为1 个酶活力单位，以u/m l,(u/g)表示4 技术要求4 门外观要求 液体剂型:褐色液体，具该醉特有的气味，允许有少量的凝聚物。固体剂型:黄揭色粉状，易溶于水。具该酶特有的气味，无潮解结块现象。42 理化卫生要求 应符合表 1 规定。中国轻工总会 1 9 9 7-0 6-2 0 批准1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施Q B/T 2 3 0 6 一1 9 9 7表 1火 戈-一 一_ _ _等 级 -一 才标项目、液 体 剂 型固 体 剂 型优等品一等品合格 品优等品一等品合格 品醉活力2 0 0 0 0 u/m L酶活力 2 0 0 0 0 u/g酶活力保存率，%妻条件2 5 C下保存6个月;5 下 保 存1 2个月2 5 下保存3个月2 5 下保存3个月2 5 C下保存6个月;5 C 下 保 存1 2个月2 5 下保存6个月2 5 C下保存6个月保存率标示醉活9 59 0标示酶活9 59 0酶耐热性存活率9 5 C.6 0 m i u%妻9 59 09 59 0p H5.8-6.8一 f操失重，%(8.0容重，g/m L1.1 5-1.2 5细度【0.4 m.(3 9目 标准筛)的通过率，%)8 58 0霓金属(以P b计)，%簇0.0 0 40.0 0 4铅(以P b 计)，%簇0.00 10.0 0 1砷(以A s 计)，%簇0.0 0 0 30.0 0 0 3菌落总数，个/m L(g)5 X1 0 5 X1 0 0大肠苗群.M P N/1 0 0.L(g)簇3 火1 0 3 X1 0 沙门氏苗(2 5 g 样)不得检出不得检出霉菌，个/.L(g)蕊1 0 02 0 01 0 02 0 0醉母菌，个/m L(g)镇1 0 02 0 01 0 02 0 0注合格品除可用于燕馏酒类外，不得用于其他食品工业。产品酶活力规格除2 0 0 0 0 u/m L(u/砂外，还可按供需合同执行5 试验方法 本方法所用的水均为蒸馏水或去离子水，所用试剂在未特殊注明时均为分析纯。5.1 酶活力的测定5.1.1 分光光度计法(第一法)5.1.1.1 原理 a-淀粉酶能将淀粉分子链中的。-1,4葡萄糖普键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝黑色的特异性反应，随淀粉降解蓝色逐渐减褪，渐变成红棕色，其颜色消失的Q B/T 2 3 0 6 一1 9 9 7速度与酶活性有关，故可在标准条件下，通过测定反应后溶液的吸光度计算其酶活力。5.1.1.2 试剂和溶液 a)原碘液 称取碘化钾2 2.O g溶于约3 0 0 m L水中，加人碘1 1.O g，在搅拌下使其溶解，然后移人5 0 0 m l容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(每月制备一次)。b)稀碘液 称取碘化钾2 0.O g 溶于约3 0 0 m L 水中，准确加人原碘液2.O O m l，全部移人5 0 O m L 容量瓶中，用水定容，贮于棕色瓶中备用(须当天配制)。c)2 0 g/L可 溶性淀粉”溶液 称取可溶性淀粉(以 绝干计)2.0 0 0 娘，精确至0.O O O l g,用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾人7 0 m L沸水中，然后，以3 0 m L水分几次冲洗盛淀粉的小烧杯，洗液并人其中，加热煮沸2 mi n直至完全透明，冷却至室温，全部移人 1 O O m L容量瓶，用水稀释至刻线。此溶液必须当天配制。d)磷酸缓冲液(p H=6.0)称取磷酸氢二钠(N a,H P O,1 2 H,0)4 5.2 3 g、柠椒酸(C,H 8 0,H 2 0)8.0 7 g，用水溶解并定容至1 O O O ml配好后，用 p H计校正。e)盐酸溶液 c(H C)二0.l m o l/L,按 G B 6 0 1 配制。5.1.1.3 仪器和设备 分光光度计;恒温水浴5 0*C-V l o o C 精度士。1 0C;试管2 5 mm X 2 0 0 m m;容量瓶;自动吸管;秒表。5.1.1.4 待测酶掖的制备 a)液体酶制剂:直接用缓冲液(5.1.1.2 d)配制，使最终酶液浓度控制在6 5-7 0 u/m l范围内。b)固体酶制剂:称取酶粉1-2 g.精确至0.0 0 0 跑，先用少量磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅棒捣研(或用磁力搅拌器搅拌)，直至固体全部溶解(约 1 0-1 5 mi n)，将上清液小心倾人容童瓶中，沉渣部分再加人少量缓冲液，如此捣研3-4 次.最后全部移人容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度(使酶浓度控制在 6 57 0 u/m l,范围内)，摇匀。通过四层纱布过滤，收集滤液供测定用。5 门.1.5 侧定 a)吸取可溶性淀粉溶液(5.1.1.2 e)2 0.O m L和缓冲液(5-1.1.2.4)5.O m L于试管中，在7 0 C 恒温水浴中预热平衡5 m i n o b)加人稀释好的待测酶液(5.1.l.4)1.O O mL，立即用秒表记录时间，摇匀，准确反应 5 m i n,c)立即用自动吸管吸取反应液b)1.O O m L，加到预先盛有0.I m o(/L盐酸0.5 m L和稀碘液(5.l.1.2 b)5.O O m L的试管中，摇匀。d)以。.l m o l/L盐酸0.5 m L和稀碘液5.O O m L的混合液作试剂空白，于6 6 0 n m波长下，用l O m m比色皿迅速测定其吸光度(A)。根据吸光度查附录A(标准的附录)，求得测试酶液的浓度(的。5.1.1.6 计算 X二 Xn X1 6.6 7 ”价 *.”(1)注:1)采用浙江婪湖食品化工联合公司生产的、标有 专供醉制剂侧定 用的字样和批号的“可溶性淀粉，Q B/T2 3 0 6 一1 9 9 7式中:义样品的酶活力，u/m l(u/9);。测试酶的浓度，u/mL;，一 一 样品的稀释倍数;1 66 7 换算常数。所得结果表示至整数。5 门 1.7 结果的允许差 平行试验相对误差不得超过2%。5，1，2 目视比色法(第二法)5.1.21 原理 同5.1.1.1。51.22 试剂和溶液 a)原碘液同5.1.1.Z a。b)稀碘液同 511，Z b.。)2 O 9/L可溶性淀粉溶液同51、1.Zc。d)磷酸缓冲液(p H 二6.0)同5.1.12 d。e)标准终点色溶液:A液:称取叙化钻(C o C I:6 H Z O)0.2 4 3 9 9 和重铭酸钾04 8 7 8 9，用水溶解定容至5 0 O m L。B 液:称取铭黑T(C:O H:N o N 0，5)4 o m g，用水溶解并定容至I O o m L。C液(标准终点色溶液:取A液4 O m L与B液5.o m L充分混匀，备用。此混合液于冰箱中保存，1 5天后需要重新配制。5，12.3 仪器和设备 恒温水浴5 0 1 0 0 精度士0.1;容量瓶;试管2 5 m mxZ 叻m m;秒表。51.24 分析步骤 待测酶液的制备:按 5。1.1 4 进行制备，但最终醉液浓度需控制在 3 0 0 一3 5 O u/m L范围内。吸取标准终点色溶液 6 mL于试管中，作为比色标准。吸取2 娘/L可溶性淀粉溶液加m L和p H 6.。的磷酸缓冲溶液s m L置于2 5 o xZ O O m m试管中，在70C 恒温水浴中预热平衡 s m in，然后加人预先稀释好的醉液0.s m L，立即用秒表记录时间，充分摇匀，当反应接近Z m in时，就开始不时地用吸管取出反应液 10 0 m L，加到预先盛有稀碘液(51，12 b)5.00m L的试管中，当试管中反应溶液颜色由紫色渐变为红棕色、恰与标准终点色溶液相同时，即为反应终点，并记录到达终点所需时间(分钟)。酶反应全部时间控制在2 25 m in之内。5.1.2.5 计算 x 二(条又 2 o x Z o/1 0 o o x，)、o s x i o“.卜，。.，二(2)“、T 产“”、“一“-一、，一 一 一式中:X 样品的酶活力，u/m L(u/9);T 到达反应终点所需时间，mi n;2 0 可洛性淀粉溶液体积，m L;2。八。0。可溶性淀粉溶液浓度，9/m L;”-一 样品稀释倍数;1 o 3 1 9 等于1 0，m g;Q s/T 2 3 0 6 一1 9 9 7 0.5一 测定酶液用量,ml52 酶活力保存率的测定 按 QS/T 1 8 0 3中第 1 1 章方法进行5.3 酶耐热性存活率的测定5.3.1 试剂和溶液5.3.1.1 氢氧化钠溶液:c(N a O H)=0.l m o l,/L按i s 6 0 1 配制。5.3.1.2 糊精溶液:称取糊精1 0 0 g 于烧杯中，加水3 0 0 m L,搅匀，加耐高温a-淀粉酶 1 3 0 0 单位(每克糊精加 玲 单位)，置于电炉上加热至沸，冷却，用。.l m o l/L氢氧化钠溶液调 p H6.0-7.0，然后移人5 0 0 m l容量瓶中，用水稀释至刻线，播匀，备用5.3.2 仪器和设备 酸度计;恒温水浴5 0-1 0 0 C精度士0.1 C;电炉1 0 0 0 w;精密温度计分度值 0.1 C;分光光度计;比色管5 0 ml;秒表。5.3.3 分析步骤53.3，1 待侧酶